膀胱移行細(xì)胞癌中sonic hedgehog和patched的表達(dá)及其意義.pdf

1、膀胱癌是我國泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，絕大多數(shù)來源于上皮組織，其中90﹪以上是移行細(xì)胞癌(transitional cell carcinoma，TCC)。初發(fā)的膀胱癌可分為表淺性和浸潤性兩種不同的行為表現(xiàn)。近年來其發(fā)病率有上升的趨勢，嚴(yán)重危害人們的健康。膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素、多基因和多步驟的病理變化過程，其確切的發(fā)病機(jī)制到目前為止仍未闡明。近年來研究發(fā)現(xiàn)“控制脊椎動物胚胎發(fā)育的信號通路可能與人類腫瘤有關(guān)”，一個(gè)與胚胎發(fā)育密切相關(guān)

2、的信號通路——Hedgehog信號通路與腫瘤發(fā)生之間的關(guān)系被受到廣泛的關(guān)注。Hedgehog信號通路，因其最上游配體Hedgehog(Hh)而得名，shh(sonic hedgehog)基因編碼一種高度保守的分泌型糖蛋白，在胚胎和成人組織中最為常見、是一個(gè)重要的發(fā)育調(diào)控因子。patched(ptch)既是Hh信號的受體，又是Hh信號通路的目的基因，在調(diào)節(jié)Hh信號通路活性中起雙重作用，在絕大多數(shù)Hh信號通路相關(guān)腫瘤中都有異常表達(dá)或突變。已

3、經(jīng)發(fā)現(xiàn)的與Hedgehog信號通路相關(guān)的腫瘤包括人類皮膚基底細(xì)胞癌、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、腦膜瘤、原發(fā)性神經(jīng)外胚層腫瘤、橫紋肌肉瘤、前列腺癌、乳腺癌、小細(xì)胞肺癌、胰腺癌、食道癌及胃癌等。 目前國內(nèi)尚未見對shh、ptch在膀胱癌中表達(dá)的研究相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道。本研究的目的是通過研究shh和ptch在膀胱移形細(xì)胞癌中的表達(dá)情況，初步探討shh和ptch在膀胱移行細(xì)胞癌中異常表達(dá)與腫瘤發(fā)生的關(guān)系，探索Hh信號通路在腫瘤發(fā)生中的作用機(jī)制，以期尋

4、找對膀胱移行細(xì)胞癌早期診斷和治療的分子靶點(diǎn)。 材料與方法 1、標(biāo)本來源收集中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院泌尿外科2005年6月至2006年12月間收治的膀胱移行細(xì)胞癌(BTCC)患者經(jīng)手術(shù)切除的標(biāo)本30例。其中男22例、女8例。年齡25～77歲，平均年齡58.80±12.95歲。初發(fā)病例27例，復(fù)發(fā)3例。另收集10例正常膀胱粘膜組織標(biāo)本(取自于良性前列腺增生癥手術(shù)患者)作為對照。年齡58～79歲，平均年齡67.40±6.15歲。膀

5、胱癌組和正常膀胱粘膜組患者年齡無顯著性差異(P<0.05)。膀胱腫瘤標(biāo)本病理分級按WHO標(biāo)準(zhǔn)：G<,1>11例、G<,2>8例、G<,3>11例。臨床分期按UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn)：T<,is>-T<,1>20例，T<,2>-T<,4>10例。 2、實(shí)驗(yàn)方法 2.1逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)采用RT-PCR檢測30例BTCC、10例正常膀胱粘膜中ptch mRNA的表達(dá)情況，并對PCR擴(kuò)增結(jié)果采用半定量分析。

6、 2.2免疫組織化學(xué)方法(S-P法)采用S-P法檢測PTCH、SHH蛋白的表達(dá)情況，操作按照試劑說明書進(jìn)行。用已知的有表達(dá)PTCH、SHH的大鼠視網(wǎng)膜組織切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，用t檢驗(yàn)、x<'2>檢驗(yàn)及Fisher精確概率法進(jìn)行檢驗(yàn)，以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果 1、RT-PCR30例BTCC組織中ptch mRNA表達(dá)的有29

7、例(96.67﹪)，10例正常膀胱粘膜組織中均有表達(dá)(100.00﹪)，ptch mRNA在膀胱癌和正常膀胱粘膜中的表達(dá)率無顯著性差異(P>0.05)。但通過對ptch mRNA表達(dá)的水平進(jìn)行半定量分析表明BTCC組明顯高于正常膀胱粘膜組，二者的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 2、免疫組織化學(xué)2、1 PTCH蛋白在BTCC組織和正常膀胱粘膜的表達(dá)PTCH蛋白在BTCC組織中的陽性表達(dá)率為60.00﹪(18/30)，在正常膀胱粘膜組織

8、中未見表達(dá)(0/10)，兩者的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表淺性BTCC(T<,is>-T<,1>)中PTCH蛋白的陽性表達(dá)率為75.00﹪(15/20)，浸潤性BTCC(T<,2>-T<,4>)陽性表達(dá)率為30.00﹪(3/10)，二者的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PTCH蛋白在G<,1>、G<,2>、G<,3>中的陽性表達(dá)率依次為90.90﹪(10/11)、62.50﹪(5/8)、27.27﹪(3/11)，G<,1>與G

9、<,2>， G<,2>與G<,3>相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，G<,1>與G<,3>差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 2、2 SHH蛋白在BTCC組織和正常膀胱粘膜的表達(dá)SHH蛋白在BTCC組織中的陽性表達(dá)率為53.33﹪(16/30)，在正常膀胱粘膜組織中未見表達(dá)(0/10)，兩者的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表淺性BTCC(T<,is>-T<,1>)中SHH蛋白的陽性表達(dá)率為70.00﹪(14/20)，浸潤

10、性BTCC(T<,2>-T<,4>)陽性表達(dá)率為20.00﹪(2/10)，二者的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。SHH蛋白在G<,1>、G<,2>、G<,3>中的陽性表達(dá)率依次為72.73﹪(8/11)、62.50﹪(5/8)、18.18﹪(2/11)，G<,1>與G<,2>，G<,2>與G<,3>相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，G<,1>與G<,3>差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 1、BTCC和正常膀