新型抑癌蛋白Nischarin在乳腺癌中的表達(dá)及對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究.pdf

1、第一部分新型抑癌蛋白Nischarin在乳腺癌組織中的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系
　　目的：探討抑癌蛋白Nischarin在乳腺癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。
　　方法：免疫組織化學(xué)法檢測(cè)67例乳腺癌和34乳腺癌癌旁標(biāo)本的Nischarin表達(dá)水平;統(tǒng)計(jì)學(xué)分析其表達(dá)水平與患者年齡、T分期、臨床分期、ER/PR/HER-2狀態(tài)等臨床參數(shù)的相互關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.Nischarin在乳腺癌組織中

2、和癌旁組織中的表達(dá):
　　Nischarin在乳腺癌組織陽(yáng)性表達(dá)率為34.3％,而癌旁組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為61.8%,顯著低于癌旁組織(p<0.05);
　　2.Nischarin與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系:
　　Nischarin在乳腺癌組織中的表達(dá)與年齡、T分期、臨床分期表達(dá)無(wú)相關(guān)性(p>0.05),與PR、HER-2表達(dá)無(wú)相關(guān)性(p>0.05);Nischarin表達(dá)與ER表達(dá)有相關(guān)性(p<0.05)。
　

3、　結(jié)論：Nischarin的缺失可能與乳腺癌相關(guān),它的高表達(dá)可能在乳腺癌組織中發(fā)揮抑癌作用。
　　第二部分Nischarin對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
　　目的：篩選低表達(dá)Nischarin的細(xì)胞系,構(gòu)建Nischarin真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染已經(jīng)篩選出的乳腺癌細(xì)胞系,探討Nischarin對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　方法：針對(duì)不同分化程度、ER/PR/HER2狀態(tài)的乳腺癌細(xì)胞系:T47D、MCF-7、MDA-MB

4、-231和正常乳腺上皮細(xì)胞HBL-100,通過(guò)RT-PCR和Western-blot和等方法檢測(cè)Nischarin在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平的表達(dá),篩選出Nischarin低表達(dá)的細(xì)胞系;構(gòu)建Nischarin過(guò)表達(dá)質(zhì)粒載體pcDNA3.1-Nischarin,以及空白載體,將其經(jīng)脂質(zhì)體Lipofectamine?2000轉(zhuǎn)染至篩選好的細(xì)胞系中,采用和RT-PCR和Western-blot等方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后其細(xì)胞Nischarin在mRN

5、A水平和蛋白水平的表達(dá),Transwell侵襲小室模型測(cè)定細(xì)胞體外侵襲能力,流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：通過(guò)篩選MDA-MB-231細(xì)胞系Nischarin表達(dá)最低,正常乳腺細(xì)胞HBL-100表達(dá)最高;Nischarin質(zhì)粒表達(dá)載體構(gòu)建經(jīng)測(cè)序鑒定后構(gòu)建成功;和RT-PCR和Western-blot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后MDA-MB-231細(xì)胞NischarinmRNA及蛋白表達(dá)水平較空白組、空載體組表達(dá)水平高(p<0.

6、05);Transwell侵襲小室模型了解MDA-MB-231細(xì)胞體外侵襲能力,轉(zhuǎn)染組較空白組及空載體組侵襲能力減弱;空載體組、空白組和實(shí)驗(yàn)組穿過(guò)小室的細(xì)胞數(shù)為252±34.59,244±31.0,181±17.62,三組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05),空載組與實(shí)驗(yàn)組之間及空白組與實(shí)驗(yàn)組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05),流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡率,空白組早期凋亡率和晚期凋亡率分別為(UR1.47%,LR1.68%);空載組:(UR1.