細(xì)支氣管肺泡癌的分子生物學(xué)研究.pdf

1、研究背景： 細(xì)支氣管肺泡癌(BAC)是肺腺癌中的一個(gè)亞型，具有單純細(xì)支氣管肺泡生長(zhǎng)模式，而沒(méi)有基質(zhì)、血管或胸膜侵犯的證據(jù)。掘報(bào)道，腺癌伴BAC特征和BAC局灶浸潤(rùn)性腺癌與單純BAC的預(yù)后的相類(lèi)似，均明顯好于其他腺癌患者。近年來(lái)一些發(fā)達(dá)國(guó)家的研究資料提示，BAC的發(fā)生率呈明顯上升趨勢(shì)。靶向治療是近年腫瘤學(xué)界韻研究熱點(diǎn)之一，大型研究顯示，對(duì)EGFR-TKI敏感的患者傾向于為腺癌或BAC，這使得對(duì)該NSCLC亞型，特別是其與EGFR之

2、間關(guān)系的研究興趣有了相當(dāng)程度的提高。人乳頭瘤病毒(HPV)是一類(lèi)嗜上皮的DNA致瘤病毒。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，不斷有從肺癌組織中檢出HPV DNA相關(guān)序列的文獻(xiàn)報(bào)道。但HPV感染與肺癌發(fā)生的關(guān)系，目前說(shuō)法不一。 目的： 探索BAC分子生物學(xué)特點(diǎn)，包括EGFR-TK結(jié)構(gòu)域的突變、EGFR和HER2的基因拷貝數(shù)和蛋白表達(dá)，探討它們與BAC的發(fā)生發(fā)展、治療反應(yīng)以及預(yù)后的關(guān)系，并探討HPV感染在BAC發(fā)生中的作用。

3、方法： 采用PCR和DNA測(cè)序法檢測(cè)中國(guó)人BAC石蠟包埋藏組織標(biāo)本EGFR基因突變情況，PCR和EGFR突變檢測(cè)試劑盒檢測(cè)BAC患者外周血EGFR基因突變情況，熒光原位雜交法(FISH)檢測(cè)組織標(biāo)本中癌細(xì)胞的EGFR和HER2基因拷貝數(shù)，免疫組織化學(xué)法(IHC)檢測(cè)EGFR和HER2的蛋白表達(dá)，PCR和DNA原位雜交法(ISH)檢測(cè)HPV DNA，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS14.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： BAC組

4、織標(biāo)本中EGFR基因突變率50％(16/32)，其中7例(占43.8％)為外顯子19上的缺失突變，1例(6.2％)為D807N，8(50％)為L(zhǎng)858R；EGFR基因突變與性別(p=0.476)、吸煙情況(p=0.414)、病理亞型(p=0.151)和EGFR蛋白表達(dá)(p=0.231)沒(méi)有顯著相關(guān)性，與EGFR基因拷貝數(shù)有非常顯著的相關(guān)性(p=0.001)。8例外周血EGFR檢測(cè)中5例(62.5％)檢測(cè)到EGFR基因突變，包括G719X

5、 1例，L858R 1例，插入突變1例，T790M 2例。EGFR基因拷貝數(shù)增加陽(yáng)性率41.2％(14/34)，與性別(p=0.681)、吸煙情況(p=0.288)和病理亞型(p=0.056)沒(méi)有顯著相關(guān)性。EGFR蛋白表達(dá)陽(yáng)性率76.5％(26/34)，與性別(p=0.702)、吸炯情況(p=0.724)、病理亞型(p=0.842)和EGFR基因拷貝數(shù)(p=0.252)均沒(méi)有顯著相關(guān)性。HER2基因拷貝數(shù)增加/基因擴(kuò)增陽(yáng)性率5.7％(

6、2/35)，蛋白表達(dá)陽(yáng)性率6.1％(2/34)，均為相同患者，他們的EGFR皋囚拷貝數(shù)增加和表達(dá)辦為陽(yáng)性。PCR擴(kuò)增檢測(cè)BAC的HPV 6/11、16、18型DNA均為陰性，ISH檢測(cè)BAC的HPV16/18型DNA僅1例(1/24，4.2％)絀胞核內(nèi)陽(yáng)性。 結(jié)論： BAC具有較高的對(duì)EGFR-TKI敏感性基因突變率、EGFR基因拷貝數(shù)增加的陽(yáng)性率和蛋白表達(dá)陽(yáng)性率，以及可能的高水平EGFR/HER2共表達(dá)，這可能間接解釋