Ⅳ型膠原粘附分選后表皮干細(xì)胞基本生物學(xué)特性的研究.pdf

1、隨著組織工程皮膚在皮膚及系統(tǒng)性疾病臨床應(yīng)用(燒傷治療和基因療法)上的不斷發(fā)展，種子細(xì)胞的選擇成為一個關(guān)鍵因素。皮膚組織工程的研究顯示表皮干細(xì)胞較其他多能干細(xì)胞有更大的優(yōu)勢，因此如何快速分選表皮干細(xì)胞也就成為一個熱門的課題，本實驗通過不同時間內(nèi)角質(zhì)形成細(xì)胞對Ⅳ型膠原的粘附特性不同，對其進(jìn)行分時分選，并對分選后的細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性的研究，為表皮干細(xì)胞的分選提供實驗依據(jù)。 將分離后人包皮的角質(zhì)形成細(xì)胞接種到預(yù)先鋪有I和Ⅳ型膠原的六孔板

2、中，在370C、CO2孵箱中分別孵育10、20、30、60min后，吸去未粘附細(xì)胞，離心法測粘附細(xì)胞在上述四個時段粘附在Ⅳ型膠原上的粘附力及粘附在I、IV型膠原20min粘附細(xì)胞的粘附力。細(xì)胞計數(shù)器測粘附數(shù)及細(xì)胞大小，并用β1整合素、外皮蛋白、CK10、CK19對貼壁10min的細(xì)胞進(jìn)行鑒定，流式細(xì)胞儀測β1整合素在四時段的陽性表達(dá)量，相差顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，并對四時段進(jìn)行克隆形成率的測定。 結(jié)果顯示：形態(tài)上貼壁細(xì)胞小而圓

3、，反光能力強(qiáng)，核漿比大。隨著時間的延長，貼壁細(xì)胞數(shù)逐漸增多，20min內(nèi)粘附細(xì)胞數(shù)與10min有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而與30min、及60min無統(tǒng)計學(xué)意義，在30min粘附的細(xì)胞最小，克隆形成率20min與30、60min有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而與10min無統(tǒng)計學(xué)意義，粘附力10min與20、30、60min有統(tǒng)計學(xué)意義，20與30min之間無統(tǒng)計學(xué)意義，I型膠原與IV膠原無差別。整合素β1間接免疫熒光、免疫組化顯示