豬骨髓極小胚胎樣干細(xì)胞的優(yōu)化分選及生物學(xué)特性鑒定.pdf

1、目的:
　　聯(lián)合采用免疫磁珠及流式細(xì)胞術(shù)分選豬骨髓極小胚胎樣干細(xì)胞(VSELs);鑒定其生物學(xué)特性，并探尋體外培養(yǎng)、擴增豬骨髓VSELs的方法。
　　方法:
　　常規(guī)消毒、麻醉后穿刺豬髂后上棘獲取骨髓，使用紅細(xì)胞裂解法獲得豬骨髓單個核細(xì)胞，運用分別耦合了CD133和Lin抗體的磁珠進(jìn)行免疫磁珠分選，對所得的CD133+細(xì)胞群和Lin-細(xì)胞群標(biāo)記熒光抗體CD133、CD45及Lin，進(jìn)一步通過流式細(xì)胞術(shù)分選獲得VSELs

2、，使用統(tǒng)計學(xué)方法分析兩種分選方法的效率，并探討聯(lián)合分選的價值;使用光學(xué)顯微鏡及透射電鏡觀察豬骨髓VSELs的形態(tài)特征和超微結(jié)構(gòu)，運用堿性磷酸酶染色和免疫熒光染色的方法鑒定其多能干細(xì)胞標(biāo)志的表達(dá);同時采用條件培養(yǎng)基對豬骨髓VSELs進(jìn)行培養(yǎng)擴增，觀察VSELs的貼壁及增殖情況。
　　結(jié)果:
　　聯(lián)合采用免疫磁珠與流式細(xì)胞分選術(shù)能夠高效的分選出豬骨髓VSELs，且使用CD133陽性分選較Lin陰性分選效率更高，但聯(lián)合分選有費用高

3、昂、細(xì)胞容易污染等缺點;豬骨髓VSELs約占總單個核細(xì)胞數(shù)量的0.01％-0.03％，該細(xì)胞體積較小、形態(tài)均一，呈二倍體核型、核大而細(xì)胞質(zhì)少、核質(zhì)比高，能夠表達(dá)多能抗原標(biāo)志Oct-4、Nanog和Sox2，同時堿性磷酸酶染色陽性;VSELs經(jīng)條件培養(yǎng)基培養(yǎng)后3-4小時可見細(xì)胞貼壁，培養(yǎng)2-3周仍無明顯增殖。
　　結(jié)論:
　　免疫磁珠及流式細(xì)胞術(shù)能夠快速的從豬骨髓中分選出數(shù)量較多、純度較高的VSELs;該細(xì)胞能表達(dá)胚胎樣干細(xì)胞