定量檢測(cè)HPPCn的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、目的:HPPCn(Hepatopoietin Cn)是一個(gè)來(lái)源于肝臟刺激物(HSS)的新型肝細(xì)胞刺激因子，可以促進(jìn)肝細(xì)胞增殖及肝臟的再生，已取得的研究結(jié)果表明HPPCn及其激活的下游信號(hào)系統(tǒng)與肝癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，可能成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)。為了進(jìn)一步鑒定研究HPPCn在生物學(xué)方面的特性和功能，分析在肝炎、肝硬化及肝癌等多種肝臟方面疾病發(fā)生過(guò)程中HPPCn的動(dòng)態(tài)變化以及與疾病的相關(guān)性，需要獲得更多的抗HPPCn抗體，為此本研究擬建立定

2、量檢測(cè)HPPCn的雙抗體夾心ELISA方法。
　　 方法:用重組HPPCn蛋白對(duì)雌性BABL/c小鼠進(jìn)行免疫刺激，收集抗血清。通過(guò)PEG-1500將脾細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞Sp2/0細(xì)胞進(jìn)行融合，形成雜交瘤細(xì)胞，采用雜交瘤技術(shù)獲得8個(gè)抗HPPCn單克隆抗體(mAb)，并經(jīng)SDS-PAGE和Western Blot等方法對(duì)純化抗體的特性進(jìn)行鑒定。純化的8個(gè)抗體應(yīng)用鍍金芯片法進(jìn)行配對(duì)檢測(cè);通過(guò)方陣滴定法確定酶標(biāo)抗體和包被抗體的最佳工作

3、濃度。按照純化的HPPCn抗原作為標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
　　 結(jié)果:我們得到了8株可以穩(wěn)定分泌抗人HPPCn抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別是Ab_3-3-3, Ab_65-29-6, Ab_9-34-1, Ab_7-8-10, Ab_4-8-12, Ab_2-30-23,Ab_12-27-23，Ab_11-11-12。得到的8種抗體均可以特異結(jié)合HPPCn抗原，其中與細(xì)胞中HPPCn結(jié)合的特異性最好的是Ab_65-29-6。通過(guò)抗體配