真皮間充質干細胞和心臟間充質干細胞的培養(yǎng)及生物學特性研究.pdf

1、畜禽種質資源是維持生態(tài)安全、農(nóng)業(yè)穩(wěn)定的重要資源，它推動著經(jīng)濟的繁榮與社會的進步。重要的家養(yǎng)動物種質資源應該受到重視，并得到有效的保護。間充質干細胞可以在體外快速增殖并且可以向其他細胞分化。這些優(yōu)點使得它們成為畜禽種質資源保存研究的新渠道。本實驗以肉雞真皮來源和鵝心臟來源的間充質干細胞為實驗對象，在體外對細胞進行了分離培養(yǎng)、生物學特性研究和誘導分化研究，并得到以下結果:
　　1.利用膠原酶Ⅰ和胰蛋白酶分離得到肉雞真皮間充質干細胞(D

2、ermal Mesenchymal Stem Cells，DMSCs),并在體外條件下培養(yǎng)31代，細胞形態(tài)主要為長梭形。RT-PCR鑒定結果顯示，細胞表達CD73、CD29、CD44，和CD71基因。免疫組織化學方法檢測結果顯示肉雞DMSCs陽性表達CD105、CD90、CD73和CD44表面標記物。通過流式細胞儀分析，CD29、CD44和CD73在肉雞DMSCs中高表達。DMSCs的生長曲線為明顯的“S”形，與細胞在體外增殖的通常規(guī)律

3、基本吻合。DMSCs的群體倍增時間和克隆形成能力的結果表明細胞的增殖能力隨著代次的升高而減弱。研究表明肉雞DMSCs能夠在一定的條件下被分化為成骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞，通過特異性染色和RT-PCR鑒定證明肉雞DMSCs向這三種細胞成功分化。
　　2.利用膠原酶Ⅱ和胰蛋白酶分離得到鵝心臟間充質干細胞(Heart-derived Mesenchymal Stem Cells，HMSCs)，并在體外培養(yǎng)21代，細胞形態(tài)特征呈現(xiàn)梭狀。

4、RT-PCR和免疫組化檢測檢測結果都顯示細胞表達CD29，CD34，CD73，CD166和CD44等MSCs特異基因。通過流式細胞術分析，CD29，CD34，CD73，CD166和CD44在鵝HMSCs中高表達。HMSCs的生長曲線表明HMSCs經(jīng)過短暫潛伏期，進入迅速增殖的對數(shù)期，而后進入穩(wěn)定期和衰亡期，呈現(xiàn)出明顯的“S”形，與細胞體外生長的基本規(guī)律吻合。群體倍增時間結果表明HMSCs的增殖能力隨著代次的升高逐漸減弱。通過在培養(yǎng)基中加

5、入適當?shù)恼T導因子對HMSCs進行體外誘導分化實驗，通過特異性染色和RT-PCR等方法對實驗結果進行檢測。實驗結果表明，HMSCs成功被分化為成骨細胞、脂肪細胞和軟骨細胞，說明鵝HMSCs可以向多個方向誘導。
　　綜上所述，本實驗成功分離培養(yǎng)了肉雞DMSCs和鵝HMSCs，并且對它們進行了生物學特性研究和誘導分化研究。結果顯示，肉雞DMSCs和鵝HMSCs均表現(xiàn)出MSCs特有的生物學特性。實驗結果對畜禽種質資源保存具有重要的意義，并