水產(chǎn)品中多種喹諾酮類(lèi)藥物殘留量檢測(cè)方法的研究.pdf

1、喹諾酮類(lèi)（Quinolones）藥物是一類(lèi)人工合成的人畜共用抗生素類(lèi)藥物，對(duì)革蘭氏陰性菌和陽(yáng)性菌、支原體、衣原體等有抗菌作用，常被用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中的病害防治。隨著人們對(duì)食品安全問(wèn)題的關(guān)注，漁藥殘留問(wèn)題不僅成為各國(guó)相關(guān)部門(mén)關(guān)注的焦點(diǎn)，也是普通民眾關(guān)心的社會(huì)問(wèn)題。近年來(lái)常用于水產(chǎn)品中藥物殘留的檢測(cè)方法主要有：酶聯(lián)免疫測(cè)定法、毛細(xì)管電泳法、氣相色譜法、高效液相色譜法和聯(lián)用技術(shù)。其中，高效液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)是目前應(yīng)用較多的方法，但是大部分方

2、法僅限于測(cè)定一種或少數(shù)幾種喹諾酮類(lèi)藥物。本論文旨在建立水產(chǎn)品中同時(shí)檢測(cè)多種喹諾酮類(lèi)藥物的高效液相色譜法和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。主要進(jìn)行以下4方面研究：
　　 1）研究建立同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中6種喹諾酮類(lèi)藥物殘留量的高效液相色譜法。根據(jù)高效液相色譜的特點(diǎn)，比較了不同的液相色譜柱對(duì)該類(lèi)藥物的分離效果，考察了對(duì)分析效果有重要影響的流動(dòng)相組成及配比、pH、流速、柱溫、最適發(fā)射和激發(fā)波長(zhǎng)等液相色譜條件；對(duì)前處理過(guò)程中樣品的提取、凈化步驟進(jìn)

3、行了對(duì)比優(yōu)化；通過(guò)對(duì)方法的檢測(cè)限和加標(biāo)回收率的驗(yàn)證，考察方法的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度和適用范圍。經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)探索，最終確定了以酸化乙腈溶液提取樣品中殘留的恩諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、噁喹酸和氟甲喹，正己烷脫脂，Varian Bond Elut C18固相萃取小柱凈化，經(jīng)Zorbax Elipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）柱分離，用高效液相色譜熒光檢測(cè)法測(cè)定，外標(biāo)法定量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)品線性關(guān)系良好，測(cè)

4、得各種藥物加標(biāo)回收率均在75.0％以上，環(huán)丙沙星、恩諾沙星、諾氟沙星和氧氟沙星檢測(cè)限為5 μg/kg，噁喹酸和氟甲喹檢測(cè)限為10 μg/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在10.00％以?xún)?nèi)。
　　 2）建立了同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中19種喹諾酮類(lèi)藥物殘留量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。試樣中19中喹諾酮類(lèi)藥物用甲酸-乙腈溶液(1:99,V/V)提取，乙腈飽和正己烷凈化，用含2 mmol/L乙酸銨的0.2％甲酸-乙腈溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，SRM掃描方

5、式進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法定量。1、5、20 μg/kg 3種濃度水平下進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)水平重復(fù)測(cè)定6次，平均回收率為76.1％～116.0％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差3.20％～13.10％?？瞻讟悠分刑砑?9種1 μg/kg的喹諾酮類(lèi)藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)測(cè)定其中17種藥物重復(fù)測(cè)定平均回收率可達(dá)到75.0％以上，氟羅沙星和吡哌酸在2 μg/kg濃度下重復(fù)測(cè)定平均回收率可達(dá)到75.0％以上，表明17種喹諾酮類(lèi)藥物檢測(cè)限可達(dá)到1 μg/kg，氟羅沙星和吡哌

6、酸檢測(cè)限可達(dá)到2 μg/kg。最后選取青蟹、鱸魚(yú)、蝦、鰻魚(yú)、草魚(yú)、鮑魚(yú)、甲魚(yú)和牡蠣，在5 μg/kg加標(biāo)濃度下進(jìn)行驗(yàn)證測(cè)定，回收率在77.6％～102.0％，RSD在13.00％以?xún)?nèi)。
　　 3）探討了上述兩種檢測(cè)方法的不確定度來(lái)源并對(duì)其進(jìn)行了分析評(píng)定，對(duì)測(cè)量結(jié)果的可靠性有了一個(gè)直觀的描述，對(duì)結(jié)果的質(zhì)量進(jìn)行了更加完整的定量描述。通過(guò)對(duì)測(cè)量結(jié)果的不確定度分析找到實(shí)驗(yàn)過(guò)程中容易對(duì)結(jié)果造成較大影響的因素，從而采取相應(yīng)措施減小或避免這些

7、影響。經(jīng)分析評(píng)定，發(fā)現(xiàn)對(duì)測(cè)量結(jié)果影響較大的不確定度分量主要來(lái)源于標(biāo)準(zhǔn)品的配制過(guò)程和加標(biāo)回收的影響，這兩個(gè)環(huán)節(jié)的檢測(cè)過(guò)程中需引起重視。
　　 4）建立的水產(chǎn)品中6種喹諾酮類(lèi)藥物檢測(cè)的高效液相色譜法已制定成行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，并已報(bào)送農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)管理部門(mén)等待審定，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法也將制定成地方標(biāo)準(zhǔn)。
　　 本課題建立的針對(duì)水產(chǎn)品中多種喹諾酮類(lèi)藥物殘留量的兩種檢測(cè)方法，樣品前處理方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可同時(shí)快速檢測(cè)多種該類(lèi)藥物殘留量，既