脂肪乳治療大鼠布比卡因心臟毒性機(jī)制的探討.pdf

1、布比卡因(Bupivacaine)是一種長(zhǎng)效酰胺類局麻藥,具有麻醉作用時(shí)間長(zhǎng),麻醉作用效果強(qiáng)的特點(diǎn),在臨床上廣泛應(yīng)用于硬膜外阻滯,蛛網(wǎng)膜下腔阻滯,臂叢神經(jīng)阻滯等,但是布比卡因也有一定的毒副作用,主要表現(xiàn)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性和心臟毒性,其中心臟毒性表現(xiàn)最明顯,布比卡因的心臟毒性主要表現(xiàn)為負(fù)性肌力和負(fù)性傳導(dǎo),如PR間期和QRS間期延長(zhǎng),心動(dòng)過(guò)緩、室性早搏,以及室性心動(dòng)過(guò)速,嚴(yán)重的可以出現(xiàn)室顫甚至心臟驟停(Cardiac Arrest)。一旦出

2、現(xiàn)心臟驟停復(fù)蘇非常困難。有研究表明用脂肪乳可以治療因布比卡因引起的心臟驟停,但是相關(guān)機(jī)制仍不太清楚,目前對(duì)脂肪乳治療布比卡因引起的心臟驟停機(jī)制主要集中在脂質(zhì)池假說(shuō),線粒體能量代謝假說(shuō),離子通道假說(shuō)等方面。本研究通過(guò)建立布比卡因心臟驟停脂肪乳復(fù)蘇的動(dòng)物模型,通過(guò)測(cè)定心肌組織中布比卡因濃度,并測(cè)定心肌組織中線粒體能量代謝的關(guān)鍵酶的活性來(lái)揭示脂肪乳治療布比卡因心臟驟停的可能機(jī)制,為臨床研究提供相關(guān)理論依據(jù)。
　　 目的：通過(guò)建立布比卡

3、因引起的心臟驟停并用脂肪乳進(jìn)行治療的動(dòng)物模型,觀察脂肪乳治療布比卡因心臟驟停的效果,并結(jié)合相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查來(lái)探討其對(duì)布比卡因引起的心臟驟停治療的相關(guān)機(jī)制,為臨床研究提供相關(guān)理論依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 1.研究對(duì)象：24只健康成年SD大鼠(體重280～320g)雌雄不拘,由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
　　 2.實(shí)驗(yàn)方法：24只SD大鼠隨機(jī)分為兩組,每組12只,A組為布比卡因致心臟驟停組,B組為布比卡因致心臟驟

4、停,脂肪乳復(fù)蘇組。20％的鹽酸氯胺酮100mg/kg腹腔注射麻醉后,將動(dòng)物仰臥固定于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)臺(tái),手術(shù)部位常規(guī)消毒后行氣管切開(kāi),氣管插管,頸總動(dòng)脈穿刺,機(jī)械通氣,股靜脈穿刺,之后分別給A組和B組大鼠于股靜脈注射10mg/kg0.5%鹽酸布比卡因致心臟驟停,A組大鼠于心臟驟停后靜脈注射15ml/kg生理鹽水和腎上腺素10μg/kg,每分鐘重復(fù)一次,總共3次,之后每5min注入腎上腺素10μg/kg。,并行人工心肺復(fù)蘇(CPR),B組大鼠于心

5、臟驟停后股靜脈注射15ml/kg20%脂肪乳和腎上腺素10μg/kg,每分鐘重復(fù)一次,總共3次,之后每5min注入腎上腺素10μg/kg,并進(jìn)行人工心肺復(fù)蘇。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中連續(xù)監(jiān)測(cè)大鼠的ECGHR,BP等基本生命指證.心肌組織和血漿中鹽酸布比卡因的濃度的測(cè)定用高效液相色譜法,這種檢測(cè)方法是一種液～液萃取法,其中萃取液是由正己烷和叔甲醚組成的混合液,將甲醇和三乙胺鹽緩沖液組成的混合液的pH值調(diào)至3.0,該混合液為流動(dòng)相。色譜柱為Dima C1

6、8色譜柱,柱溫30℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm,流速1.0ml/mim色譜進(jìn)樣量為25μl。2ml的50%甲醇作為溶劑與0.5mg心臟組織一起勻漿,取200μl勻漿液與100μl的4%NaOH溶液混合后在一起渦旋30秒,在渦旋好的混合液中加入3ml萃取液,之后再渦旋3min,將渦旋好的混合液于3000r/min離心10min,取有機(jī)相2ml于離心管中,將其放置于水浴箱中,將溫度調(diào)至35℃,在水域的條件下用氮?dú)獍延袡C(jī)相吹干,把100μl流動(dòng)相

7、加入錐形瓶中與所得的干燥殘留物混合渦旋30秒,然后放置離心機(jī)中將轉(zhuǎn)數(shù)設(shè)置成12000r/min,高速離心10min,用移液器精確量取75μl離心好的上層液,放入250μl管形瓶中,HPLC系統(tǒng)每次自動(dòng)抽取25μl檢測(cè)。并用ELISA檢測(cè)法測(cè)定心肌組織中肉堿-脂酰肉堿轉(zhuǎn)移酶(CACT)的活性。
　　 結(jié)果：
　　 1.兩組動(dòng)物基本生命BP,HR,WET等無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　 2.與A組大鼠相比,B組大