谷氨酰胺減弱LPS誘導牛睪丸支持細胞炎癥損傷的作用及其機制.pdf

1、雄性家畜常因發(fā)生睪丸炎而喪失生育能力，而脂多糖（LPS）是引起炎癥的關鍵細胞毒性因子，這也是人們在臨床研究中常用LPS制造炎癥模型的原因所在。此外，人類醫(yī)學研究發(fā)現，熱休克蛋白72（HSP72）有明顯的抗炎癥作用，而谷氨酰胺（Gln）可誘導HSP72的表達。但是，Gln是否可調控HSP72表達從而減輕LPS誘導的細胞炎癥損傷還不得而知。
　　試驗觀察熱應激、LPS、Gln誘導牛睪丸支持細胞（SCs）對 HSP72表達情況的影響。試

2、驗將傳至第3代的牛睪丸支持細胞分成熱應激（37℃、39℃和41℃）及其對照（34℃）組，LPS（0、0.1、1、10、50和100μg/mL）和Gln（0、0.5、1、2、4和8 mmol/L）處理組，用CCK-8試劑盒檢測各組細胞活性，結果發(fā)現，39℃熱應激1h、2 mmol/L的Gln和0.1μg/mL的LPS與細胞共培養(yǎng)12 h并恢復培養(yǎng)4h的條件下，細胞生長抑制率分別為8.22％，9.19%和5.80%。
　　用RT-PC

3、R和Western-Blot方法分別檢測上述條件39℃熱應激1 h、0.1μg/mL LPS、2 mmol/L Gln處理后0、2、4、6、8、12、14和16 h時細胞內HSP72 mRNA和蛋白表達。結果顯示，三種處理方式均能誘導HSP72表達，且HSP72蛋白在熱應激處理后2 h表達最高，HSP72蛋白在LPS處理后12h表達最高，Gln處理后4 h表達最高。
　　將培養(yǎng)的睪丸支持細胞隨機分為4個組，對照組為空白組，LPS組

4、為0.1μg/mLLPS刺激12 h組，Gln組為2 mmol/L的Gln預保護12 h組，LPS+Gln組為2 mmol/L的Gln預保護12 h后LPS刺激4 h組，運用qRT-PCR、Western-Blot等方法分別檢測HSP72、IRAK-M、Tollip、A20、JNK、P38和p-P38的表達，ELISA檢測IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13和IL-17的表達。
　　結果顯示，與空白組相比，LPS

5、組IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13和IL-17的表達量顯著升高（P<0.05），LPS+Gln組與LPS組相比上述指標表達量顯著降低（P<0.05）；同樣與空白對照組相比，LPS組 HSP72、IRAK-M、Tollip、A20、JNK、P38顯著升高（P<0.05），LPS+Gln組與LPS組相比上述指標降低。
　　結論：根據熱應激、Gln和LPS對牛睪丸支持細胞生長的抑制率分別為8.22%，9.19%和5

6、.80%，選擇39℃熱應激處理以及0.1μg/mL的LPS和2 mmol/L的Gln添加量進行實驗。在39℃熱應激處理條件下 HSP72 mRNA、蛋白的時效表達表達量最高的時間分別為0h、2h。2 mmol/L Gln的處理條件下HSP72mRNA、蛋白的時效表達表達量最高的時間分別為2 h、4 h。0.1μg/mL的LPS處理條件下，HSP72mRNA和蛋白的時效表達表達量最高的時間分別為10 h和12 h。Gln處理的炎癥反應的S