谷氨酰胺對肝硬化大鼠腸屏障功能的保護(hù)作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：本文旨在探討谷氨酰胺對肝硬化大鼠腸屏障功能損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。 方法：采用復(fù)合因素致肝硬化模型，50只雄性Wistar大鼠，體重220～250g，完全隨機(jī)分為5組。正常對照組(NC組)，肝硬化模型組(M6、M10)，谷氨酰胺組(M6+谷氨酰胺、M10+GLN)，處死前三周，加用新麥林顆粒(100％谷氨酰胺)灌胃，劑量為1.0g/100g體重/天，期間繼續(xù)采用復(fù)合因素造模，各組動物分別于第6、10周末處死。肝臟HE、VG

2、 (膠原纖維染色)確定肝硬化的形成；腸組織的HE染色觀察腸組織病理損傷情況，透射電鏡觀察回腸黏膜超微結(jié)構(gòu)改變；檢測腹主動脈血及門靜脈血內(nèi)毒素、血二胺氧化酶(DAO)、腫瘤壞死因子-α (TNF-α)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)；腸勻漿的NO、肝勻漿還原型谷胱甘肽(GSH)；TNEL法檢測腸上皮細(xì)胞的凋亡。 結(jié)果： 1 肝硬化大鼠模型建立情況： 肝臟HE、VG染色結(jié)果證實，6周末為肝硬化病變早期，10周

3、末為肝硬化病變期。 2 肝硬化腸屏障的損傷 2.1 腸黏膜的光鏡、電鏡觀察結(jié)果： 光鏡觀察：腸黏膜HE染色可見肝硬化模型組腸絨毛水腫、斷裂、脫落，大量炎性細(xì)胞浸潤，以模型10周組最為明顯。正常對照組無上述變化。電鏡觀察：肝硬化模型組主要表現(xiàn)為上皮細(xì)胞微絨毛稀疏、變短、甚至倒伏斷裂；細(xì)胞間連接增寬，腺上皮細(xì)胞和吸收細(xì)胞內(nèi)線粒體腫脹，嵴斷裂、減少，細(xì)胞核固縮，異染色質(zhì)邊集。谷氨酰胺治療組較同期肝硬化模型組病變減輕。

4、 2.2 門靜脈內(nèi)毒素水平與血漿DAO水平： 各肝硬化模型組及谷氨酰胺治療組均高于正常對照組(P<0.05)，并且與肝硬化造模時間有關(guān)，M10組高于M6組(P<0.05)。谷氨酰胺治療組門靜脈內(nèi)毒素水平均低于同期肝硬化模型組，M10+GLN組水平低于M10組(P<0.05)。 3 IETM的形成： 各肝硬化模型組及谷氨酰胺治療組 腹主動脈血漿內(nèi)毒素水平均高于正常對照組(P<0.05)，表明肝硬化時伴

5、隨腸源性內(nèi)毒素血癥，且內(nèi)毒素水平與造模時間有關(guān)，M10組高于M6組(P<0.05)。谷氨酰胺治療組內(nèi)毒素水平均較同期的肝硬化模型組降低(P<0.05)。表明谷氨酰胺可以減輕腸源性內(nèi)毒素血癥。 4 腸勻漿的NO水平與血TNF-α： 各肝硬化模型組及谷氨酰胺治療組內(nèi)毒素水平均高于正常對照組(P<0.05)，M10組高于M6組(P<0.05)，谷氨酰胺治療組均低于同期的肝硬化模型對照組，M10+GLN組與M10組相比有顯著性差

6、異(P<0.05)。 5 肝勻漿GSH及血ALT、ALB： 血ALB與肝勻漿GSH水平：各肝硬化模型組及谷氨酰胺治療組均低于正常對照組(P<0.05)，且與造模時間有關(guān)，M10組低于M6組(P<0.05)。肝勻漿GSH水平M10+GLN組與M10組相比有顯著性差異(P<0.05)。 ALT水平：各肝硬化模型組及谷氨酰胺治療組ALT水平均高于正常對照組(P<0.05)，且與造模時間有關(guān)，M10組顯著高于M6組(P<

7、0.05)，谷氨酰胺治療組均低于同期的肝硬化模型組，但僅M10+GLN組與M10組相比有顯著性差異(P<0.05)。 6 腸上皮細(xì)胞凋亡檢測： 凋亡指數(shù)與肝硬化造模時間有關(guān)，正常對照組、M6組、M10組凋亡指數(shù)逐漸增高，(P<0.05)。谷氨酰胺治療組顯著低于同期肝硬化模型組(P<0.05)。 7 相關(guān)分析結(jié)果： 肝臟勻漿GSH與血ALT相關(guān)分析：r=-0.69，P<0.01腹主動脈血內(nèi)毒素與ALT相關(guān)分

8、析：r=0.88，P<0.01腹主動脈血內(nèi)毒素與ALB相關(guān)分析：r=-0.65，P<0.01腹主動脈血內(nèi)毒素與血TNF-α相關(guān)分析：r=0.66，P<0.01腹主動脈漿內(nèi)毒素與腸勻漿NO相關(guān)分析：r=0.81，P<0.01凋亡指數(shù)與門靜脈血內(nèi)毒素相關(guān)分析：r=0.81，P<0.01凋亡指數(shù)與血漿DAO相關(guān)分析：r=0.74，P<0.01。 結(jié)論： 1、肝硬化常發(fā)生腸屏障功能的損傷及IETM，并隨肝硬化造模時間的延長而加重