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文檔簡介
1、目的:本文旨在探討谷氨酰胺對肝硬化大鼠腸屏障功能損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。 方法:采用復(fù)合因素致肝硬化模型,50只雄性Wistar大鼠,體重220~250g,完全隨機(jī)分為5組。正常對照組(NC組),肝硬化模型組(M6、M10),谷氨酰胺組(M6+谷氨酰胺、M10+GLN),處死前三周,加用新麥林顆粒(100%谷氨酰胺)灌胃,劑量為1.0g/100g體重/天,期間繼續(xù)采用復(fù)合因素造模,各組動物分別于第6、10周末處死。肝臟HE、VG
2、 (膠原纖維染色)確定肝硬化的形成;腸組織的HE染色觀察腸組織病理損傷情況,透射電鏡觀察回腸黏膜超微結(jié)構(gòu)改變;檢測腹主動脈血及門靜脈血內(nèi)毒素、血二胺氧化酶(DAO)、腫瘤壞死因子-α (TNF-α)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、白蛋白(ALB);腸勻漿的NO、肝勻漿還原型谷胱甘肽(GSH);TNEL法檢測腸上皮細(xì)胞的凋亡。 結(jié)果: 1 肝硬化大鼠模型建立情況: 肝臟HE、VG染色結(jié)果證實,6周末為肝硬化病變早期,10周
3、末為肝硬化病變期。 2 肝硬化腸屏障的損傷 2.1 腸黏膜的光鏡、電鏡觀察結(jié)果: 光鏡觀察:腸黏膜HE染色可見肝硬化模型組腸絨毛水腫、斷裂、脫落,大量炎性細(xì)胞浸潤,以模型10周組最為明顯。正常對照組無上述變化。電鏡觀察:肝硬化模型組主要表現(xiàn)為上皮細(xì)胞微絨毛稀疏、變短、甚至倒伏斷裂;細(xì)胞間連接增寬,腺上皮細(xì)胞和吸收細(xì)胞內(nèi)線粒體腫脹,嵴斷裂、減少,細(xì)胞核固縮,異染色質(zhì)邊集。谷氨酰胺治療組較同期肝硬化模型組病變減輕。
4、 2.2 門靜脈內(nèi)毒素水平與血漿DAO水平: 各肝硬化模型組及谷氨酰胺治療組均高于正常對照組(P<0.05),并且與肝硬化造模時間有關(guān),M10組高于M6組(P<0.05)。谷氨酰胺治療組門靜脈內(nèi)毒素水平均低于同期肝硬化模型組,M10+GLN組水平低于M10組(P<0.05)。 3 IETM的形成: 各肝硬化模型組及谷氨酰胺治療組 腹主動脈血漿內(nèi)毒素水平均高于正常對照組(P<0.05),表明肝硬化時伴
5、隨腸源性內(nèi)毒素血癥,且內(nèi)毒素水平與造模時間有關(guān),M10組高于M6組(P<0.05)。谷氨酰胺治療組內(nèi)毒素水平均較同期的肝硬化模型組降低(P<0.05)。表明谷氨酰胺可以減輕腸源性內(nèi)毒素血癥。 4 腸勻漿的NO水平與血TNF-α: 各肝硬化模型組及谷氨酰胺治療組內(nèi)毒素水平均高于正常對照組(P<0.05),M10組高于M6組(P<0.05),谷氨酰胺治療組均低于同期的肝硬化模型對照組,M10+GLN組與M10組相比有顯著性差
6、異(P<0.05)。 5 肝勻漿GSH及血ALT、ALB: 血ALB與肝勻漿GSH水平:各肝硬化模型組及谷氨酰胺治療組均低于正常對照組(P<0.05),且與造模時間有關(guān),M10組低于M6組(P<0.05)。肝勻漿GSH水平M10+GLN組與M10組相比有顯著性差異(P<0.05)。 ALT水平:各肝硬化模型組及谷氨酰胺治療組ALT水平均高于正常對照組(P<0.05),且與造模時間有關(guān),M10組顯著高于M6組(P<
7、0.05),谷氨酰胺治療組均低于同期的肝硬化模型組,但僅M10+GLN組與M10組相比有顯著性差異(P<0.05)。 6 腸上皮細(xì)胞凋亡檢測: 凋亡指數(shù)與肝硬化造模時間有關(guān),正常對照組、M6組、M10組凋亡指數(shù)逐漸增高,(P<0.05)。谷氨酰胺治療組顯著低于同期肝硬化模型組(P<0.05)。 7 相關(guān)分析結(jié)果: 肝臟勻漿GSH與血ALT相關(guān)分析:r=-0.69,P<0.01腹主動脈血內(nèi)毒素與ALT相關(guān)分
8、析:r=0.88,P<0.01腹主動脈血內(nèi)毒素與ALB相關(guān)分析:r=-0.65,P<0.01腹主動脈血內(nèi)毒素與血TNF-α相關(guān)分析:r=0.66,P<0.01腹主動脈漿內(nèi)毒素與腸勻漿NO相關(guān)分析:r=0.81,P<0.01凋亡指數(shù)與門靜脈血內(nèi)毒素相關(guān)分析:r=0.81,P<0.01凋亡指數(shù)與血漿DAO相關(guān)分析:r=0.74,P<0.01。 結(jié)論: 1、肝硬化常發(fā)生腸屏障功能的損傷及IETM,并隨肝硬化造模時間的延長而加重
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