AkT-YAP信號(hào)通路在谷氨酰胺饑餓誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡過程中的作用研究.pdf

1、目的:研究谷氨酰胺(glutamine，Gln)饑餓對(duì)細(xì)胞生長及活力的影響，探討Akt-YAP(proteinkinaseB-Yes-associatedprotein)信號(hào)通路在Gln調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡過程中的作用機(jī)制。
　　方法:以體外培養(yǎng)的Hela細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。首先用不同濃度胎牛血清(fetalbovineserum,FBS)和Gln(10％FBS+4mMGln、10％FBS+Gln-Free、FBS-Free+4mMGln、

2、FBS-Free+Gln-Free)分別培養(yǎng)Hela細(xì)胞24h和48h，細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況;不同濃度Gln(4、2、1、0.5、0.1、0mM)培養(yǎng)Hela細(xì)胞24h，CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活性，Westernblot檢測(cè)Bax蛋白的表達(dá);
　　不同濃度Gln(4、2、1、0.5、0.1、0mM)或Gln4mM、Gln0mM和Akt抑制劑LY29400240μM+Gln4mM分別培養(yǎng)Hela細(xì)胞24h，Westernblot

3、檢測(cè)pAkt和Bax蛋白的表達(dá);
　　不同濃度Gln(4、2、1、0.5、0.1、0mM)培養(yǎng)Hela細(xì)胞24h，Westernblot檢測(cè)pYAP和YAP蛋白的表達(dá);利用siRNA干擾Hela細(xì)胞YAP蛋白的表達(dá)，Gln4mM或0mM分別培養(yǎng)正常細(xì)胞或轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞24h，Westernblot檢測(cè)Bax蛋白的表達(dá);分別用Gln4mM、Gln0mM和Akt抑制劑LY29400240μM+Gln4mM培養(yǎng)細(xì)胞24h，Westernb

4、lot檢測(cè)pYAP蛋白及胞漿和胞核YAP蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:不論是否添加FBS，不含Gln的培養(yǎng)基細(xì)胞生長速度緩慢，細(xì)胞數(shù)量顯著降低(P＜0.05);低濃度Gln(0.5、0.1、0mM)組細(xì)胞活性明顯下降(P＜0.05)，Bax表達(dá)增加;
　　隨著Gln濃度的降低pAkt表達(dá)降低，Gln饑餓和Akt抑制劑均增加了Bax蛋白的表達(dá);
　　隨著Gln濃度的降低pYAP表達(dá)降低，利用siRNA干擾YAP蛋白的表達(dá)降低了