不同化學基團對卵巢癌SkoV-3細胞生物學行為影響的實驗研究.pdf

1、目的:
　　本研究將不同化學基團(-CH3、-NH2、-OH、-COOH、-SH)接枝于基片上，構成帶有不同單一化學基團的自組裝單分子膜(SAMs)，構建含有不同化學基團的細胞微環(huán)境，研究微環(huán)境中不同化學基團對卵巢癌細胞生長特征及細胞轉(zhuǎn)移的影響，闡明微環(huán)境中化學基團在卵巢癌發(fā)生和發(fā)展中的作用及機制，為卵巢癌的治療探索一條新途徑。
　　方法:
　　1.體外培養(yǎng)人卵巢癌細胞Skov-3，與攜帶不同的化學基團（-OH、-CO

2、OH、-NH2、-SH、-CH3）的自組裝單分子膜(self-assembled monolayers，SAMs)共培養(yǎng)。
　　2.通過接觸角實驗反應不同化學基團的親疏水性。
　　3.掃描電鏡(Scanning Electron Microscope，SEM)觀察與攜帶不同的化學基團共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細胞形態(tài)。
　　4.DAPI染色法觀察與攜帶不同的化學基團共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細胞在60min的早期粘附情

3、況。
　　5.細胞骨架染色觀察與攜帶不同的化學基團共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細胞肌動蛋白粘著斑的變化。
　　6.SKOV-3細胞與攜帶不同的化學基團共培養(yǎng)5天，MTT法檢測其細胞增殖率。
　　7.檢測不同化學基團的細胞毒性:Calcein/PI染色觀察與攜帶不同的化學基團共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3的死活細胞數(shù)目;LDH檢測細胞培養(yǎng)上清中LDH的酶活性，來檢測細胞毒性
　　8.流式細胞儀檢測與攜帶不同的化學基團共培

4、養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細胞凋亡。
　　9.流式細胞儀檢測與攜帶不同的化學基團共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細胞周期。
　　10.Transwell小室檢測與攜帶不同的化學基團共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細胞遷移能力。
　　11.實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測與細胞轉(zhuǎn)移相關的基因E-cadherin和β-catenin的表達。
　　結(jié)果:
　　1.接觸角實驗表明-OH為極親水性基團，-COOH和-NH2為

5、親水性基團，-CH3為極疏水性基團。
　　2.掃描電鏡顯示在-CH3表面Skov-3細胞鋪展狀態(tài)差，呈球形;相對于其他基團，-NH2表面細胞呈多邊形，鋪展面積大，細胞核增大，細胞間相互連接。
　　3.-COOH、-NH2基團表面的SKOV-3的DAPI細胞染色數(shù)目均明顯多于對照組（P＜0.05)。
　　4.細胞骨架染色顯示-CH3干預后的Skov-3細胞形態(tài)及邊界不清，膜周染色變淡，細胞核區(qū)模糊;而-COOH和-NH2

6、表面上的細胞呈多邊形。
　　5.MTT實驗結(jié)果表明-CH3表面卵巢癌SKOV-3細胞增殖明顯受到抑制(P＜0.01)，NH2可促進細胞增殖。
　　6.Calcein/PI染色及LDH實驗結(jié)果提示:-SH、-CH3對卵巢癌Skov-3具有細胞毒性;
　　7.-CH3有促進Skov-3細胞凋亡及死亡的作用（P＜0.05）。
　　8.與-OH和-CH3共培養(yǎng)的SKOV-3細胞在有絲分裂相(G2/M)的百分比分別是明顯少

7、于對照組(P＜0.01)。
　　9.與-CH3共培養(yǎng)的Skov-3細遷移數(shù)明顯低于對照組(P＜0.01)。
　　10.實時熒光定量PCR結(jié)果顯示:-CH3明顯增加E-cadherin、β-catenin基因表達，而在-NH2組E-cadherin、β-catenin基因表達均明顯下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1.不同化學基團可影響卵巢癌Skov-3細胞形態(tài)和細胞粘附:親水性基團-NH2表面，卵巢癌Skov-3細胞生長狀

8、態(tài)佳，細胞粘附數(shù)量多;-CH3、-SH、-OH表面細胞形態(tài)差，對細胞粘附無明顯影響。
　　2.不同化學基團可影響卵巢癌Skov-3細胞的增殖、細胞毒性、細胞周期及凋亡:疏水性基團-CH3可抑制肌動蛋白的形成，抑制細胞的有絲分裂，使卵巢癌Skov-3細胞增殖能力明顯下降，且具有細胞毒性，促進細胞凋亡及死亡;-NH2、-COOH不具有細胞毒性;-NH2促進細胞增殖。
　　3.不同化學基團可影響卵巢癌Skov-3細胞的遷移:-OH

9、、-CH3抑制卵巢癌Skov-3細胞的遷移能力，-NH2促進細胞遷移。
　　4.不同化學基團通過EMT過程影響卵巢癌Skov-3細胞生物學行為:-NH2使E-cadherin、β-catenin基因表達明顯下調(diào)，促進Skov-3的發(fā)生發(fā)展。而-CH3組E-cadherin、β-catenin基因的表達明顯上調(diào)，CH3可能通過影響上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化而抑制卵巢癌細胞的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移。
　　本實驗研究提示了-CH3不利于卵巢癌S