TGF-β1對宮頸癌SiHa細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：
　　宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，轉(zhuǎn)移是影響宮頸癌患者預(yù)后的重要因素。本研究用5ng/mL轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming growth factor-β1, TGF-β1)作用SiHa細(xì)胞72 h,通過倒置顯微鏡、CCK-8實(shí)驗(yàn)、單細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)和 Transwell小室實(shí)驗(yàn)分別觀察TGF-β1作用前后Siha細(xì)胞形態(tài)、增殖能力、克隆形成能力、粘附能力、遷移及侵襲能力的改變；分析宮頸癌 SiH

2、a細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的相關(guān)性；闡明TGF-β1導(dǎo)致宮頸癌SiHa細(xì)胞發(fā)生EMT的可能分子機(jī)制，為以TGF-β1為靶點(diǎn)的宮頸癌的治療提供系統(tǒng)的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1:研究 TGF-β1對宮頸癌 SiHa細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。用5ng/mL TGF-β1作用Siha細(xì)胞72 h,通過倒置顯微鏡、CCK-8實(shí)驗(yàn)、單細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)

3、、細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)和Transwell小室實(shí)驗(yàn)分別觀察TGF-β1作用前后SiHa細(xì)胞形態(tài)、增殖能力、克隆形成能力、粘附能力、遷移及侵襲能力的改變。
　　2:研究TGF-β1體外誘導(dǎo)宮頸癌SiHa細(xì)胞對細(xì)胞外基質(zhì)降解及血管生成的影響。Western blot檢測TGF-β1作用SiHa細(xì)胞前后基質(zhì)金屬蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2, MMP-2), MMP-9及血管內(nèi)皮生長因子(Vascular en

4、dothelial growth factor, VEGF)表達(dá)的改變。
　　3:分析宮頸癌 SiHa細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的相關(guān)性，闡明TGF-β1導(dǎo)致宮頸癌SiHa細(xì)胞發(fā)生EMT的可能分子機(jī)制。Western blot檢測TGF-β1作用SiHa細(xì)胞前后囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, CFTR), P50, p

5、65, E-cadherin及Vimentin蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1：5ng/mL TGF-β1作用SiHa細(xì)胞72 h后, SiHa細(xì)胞出現(xiàn)上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變、粘附能力減弱、遷移和侵襲能力增強(qiáng)，但對 SiHa細(xì)胞的增殖和克隆形成沒有明顯影響。
　　2：5ng/mL TGF-β1作用 SiHa細(xì)胞72 h后, SiHa細(xì)胞表達(dá) MMP-2, MMP-9和VEGF上調(diào)。
　　3：5ng/mL