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文檔簡介
1、目的:肺間充質(zhì)干細胞為肺間充質(zhì)來源的內(nèi)源性成體干細胞,能夠自我復(fù)制并分化成肺組織中的各種間充質(zhì)及非間充質(zhì)細胞,參與肺損傷的修復(fù)過程,是急性肺損傷及各種肺部疾病治療的潛在靶點。全氟化碳為肺液體通氣治療的主要介質(zhì),具有高攜氧性及生物抗炎效應(yīng),但其治療急性肺損傷的機制仍不明確,本研究擬從全氟化碳對肺間充質(zhì)干細胞生物學特性的影響方面探討全氟化碳治療急性肺損傷的作用機制。
方法:
(1)采用膠原蛋白酶消化法從大鼠肺臟中提取LM
2、SC,并對所提取細胞的表面標志抗原及體外誘導(dǎo)分化能力進行鑒定。
(2)將細胞分為LMSC組和PFC處理組,分別繪制兩組生長曲線并檢測細胞周期以觀察PFC對LMSC體外生長增殖的影響。
(3)將細胞分為對照組、SAGM誘導(dǎo)分化組和SAGM+PFC組,誘導(dǎo)LMSC向肺上皮細胞分化,分別采用RT-qPCR及免疫熒光檢測SPC和AQP5的mRNA和蛋白表達,觀察PFC對LMSC向肺泡上皮分化能力的影響。
(4)將細
3、胞分為對照組、LPS(200ng/ml)組、PFC組以及LPS(200ng/ml)+PFC組,分別干預(yù)24h后,采用RT-qPCR檢測細胞IL-1ra、KGF、VEGF、HGF、TSG-6、ANG-1和TGF-β的mRNA表達,采用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中HGF的分泌量,以觀察PFC對LMSC旁分泌能力的影響。
結(jié)果:
(1)從大鼠肺臟組織中提取的細胞體外培養(yǎng)貼壁,免疫表型為CD29+/CD54+/CD90+
4、/CD45-/CD11b-/CD31-,能夠誘導(dǎo)向成脂、成骨和成軟骨方向分化,可以鑒定為LMSC。
(2) LMSC的生長曲線及細胞周期檢測均符合干細胞特點,PFC組生長曲線及細胞周期均較LMSC組無明顯差異。
(3)誘導(dǎo)分化組及PFC組均可見SPC和AQP5表達,對照組免疫熒光基本無SPC和AQP5表達。前兩組SPC和AQP5的平均光密度值及mRNA相對表達量均顯著高于對照組。誘導(dǎo)分化組SPC平均光密度值及mRNA
5、相對表達量均高于PFC組,但兩組之間AQP5的平均光密度值及mRNA相對表達量無統(tǒng)計學差異。
(4) LPS組IL-1ra、KGF、VEGF和TSG-6 mRNA表達高于對照組。LPS+PFC組IL-1ra、KGF及VEGF mRNA表達高于LPS組。細胞培養(yǎng)上清中LPS組HGF含量明顯高于對照組,LPS+PFC組則高于LPS組。PFC組和對照組之間所有旁分泌因子表達均無差異。
結(jié)論:
(1)利用膠原酶消化
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