遼寧堿蓬SINAC8基因克隆和功能分析.pdf

1、NAC轉(zhuǎn)錄因子是植物細(xì)胞中特有的一類(lèi)調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育、與植物抵御生物和非生物脅迫密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，它通過(guò)與植物細(xì)胞中的其他基因啟動(dòng)子中的順式作用元件相結(jié)合，來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)相關(guān)生命活動(dòng)的基因表達(dá)的促進(jìn)或抑制。
　　遼寧堿蓬（Suaeda liaotungensisK.）是一種耐鹽性很強(qiáng)的鹽生植物，它可以生活在高鹽堿度的自然區(qū)域內(nèi)，其細(xì)胞中一定含有大量與抗鹽脅迫相關(guān)的基因。通過(guò)研究遼寧堿蓬的非生物脅迫抗性基因和抗逆機(jī)制，可以為增強(qiáng)其他經(jīng)濟(jì)

2、作物的非生物脅迫抗性提供更多的理論依據(jù)和基因來(lái)源。
　　本研究從實(shí)驗(yàn)室前期工作得到的遼寧堿蓬轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中篩選得到一條EST序列，命名為SlNA C8。通過(guò)PCR技術(shù)，擴(kuò)增得到了750 bp具有完整開(kāi)放閱讀框(ORF)的SlNAC8cDNA序列，開(kāi)放閱讀框576 bp，編碼191個(gè)氨基酸。通過(guò)構(gòu)建SlNAC8的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，并對(duì)SlNAC8編碼的蛋白與其他NAC蛋白進(jìn)行多序列比對(duì)，初步分析認(rèn)為SlNAC8屬于NAM亞家族。
　　

3、采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，對(duì)SlNAC8在遼寧堿蓬不同器官中、不同非生物脅迫（高鹽、低溫、干旱、ABA）不同時(shí)間的表達(dá)特性進(jìn)行分析。結(jié)果表明，非脅迫處理?xiàng)l件下，SlNAC8基因在遼寧堿蓬不同器官中的表達(dá)情況不同，葉中表達(dá)量高，莖中其次，根中最低。在不同的非生物脅迫下，SlNAC8的表達(dá)都呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)，但是不同脅迫下，呈現(xiàn)最高表達(dá)的時(shí)間點(diǎn)不同，并且在鹽脅迫、低溫脅迫和ABA脅迫中，SlNAC8的表達(dá)量呈現(xiàn)顯著趨勢(shì)。SlNAC8基因響應(yīng)高鹽

4、、低溫、ABA脅迫。
　　基因槍法將連有SlNA C8的瞬時(shí)表達(dá)載體pEGAD-GFP-SlNA C8轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)SlNAC8蛋白定位于細(xì)胞核中。將SlNAC8的N端、C端和ORF分別連接酵母表達(dá)載體，將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化酵母菌進(jìn)行轉(zhuǎn)錄激活實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)表明，SlNAC8的C端和ORF全長(zhǎng)具有轉(zhuǎn)錄激活活性。亞細(xì)胞定位、轉(zhuǎn)錄激活活性分析結(jié)果顯示，SlNAC8是轉(zhuǎn)錄因子。
　　構(gòu)建pBI121-SlNA C8植物表達(dá)載體，蘸花法