牛分枝桿菌免疫優(yōu)勢抗原基因的克隆表達及納米疫苗初步研究.pdf

1、牛分枝桿菌免疫優(yōu)勢抗原基因的克隆表達及納米疫苗初步研究CloningandExpressingofImmunodominantAntigenGenesofMycobacter／umBovisandPreliminaryStudyOilnanovaccine課題來源：國家自然科學基金(項目號：31160515)指導教師：王玉蛔教援申請學位門類級別：理堂亟名方學業(yè)究在專研所摘要牛結核病(Bovinetuberculosis)是由牛分枝桿菌(

2、MycobacteriumBovis)所引起的慢性致死性人獸共患傳染病。它的流行與傳播不僅嚴重影響畜牧業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展，造成了巨額的經(jīng)濟損火，而且威脅到人類的健康。研究發(fā)現(xiàn)納米粒子具有緩釋性、穩(wěn)定性、靶向性和安全性等優(yōu)點，將為預防牛結核病納米疫苗的研發(fā)帶來希望。因此，本研究探討了制備預防牛結核病的新型納米疫苗，并對其免疫原性進行初步研究。以牛分枝桿菌C68001株基因組DNA為模板，通過分子克隆技術構建免疫優(yōu)勢抗原CFPl0，ESAT6，

3、A985A和A985B的原核表達載體。首先對載體pET28aa985b進行誘導表達和純化，利用Westernblotting進行鑒定。以明膠為載體材料包裹A985B蛋自制備納米疫苗，檢測其載藥率和包封率，并采用透射電鏡對納米顆粒進行表征分析。以小鼠為實驗模型，分別從體液免疫、細胞免疫和黏膜免疫三方面對制備的納米疫苗進行初步的免疫原性的研究。本實驗結果表明：(1)構建了重組表達質粒pET28acJ白10、pET28aesat6、pET28

4、aa985a和pET28aa985b和相應的重組基因工程菌株；(2)誘導表達和純化了重組蛋白A985B；(3)制備了以明膠為載體材料載免疫優(yōu)勢抗原蛋白A985B的納米疫苗，該疫苗穩(wěn)定性好，疫苗顆粒粒徑均一，平均粒徑在100n／／l左右；載藥率為7183％，包封率為4103％，達到了納米疫苗顆粒的。I_：藝要求；(4)載免疫優(yōu)勢抗原蛋白A985B的納米疫苗能誘發(fā)機體產(chǎn)生較高的IgG抗體水平，提高了IFN)、IL2和黏膜slgA的表達量，且