L-Wnt3a細胞及其條件培養(yǎng)基支持小鼠胚胎干細胞的增殖與分化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、小鼠胎兒成纖維細胞經常作為飼養(yǎng)層細胞用于胚胎干細胞的培養(yǎng)。然而，使用胎兒成纖維細胞作飼養(yǎng)層受到細胞代次等因素限制，并且，制備小鼠胎兒成纖維細胞要消耗大量的實驗動物。L-Wnt3a細胞是一種經遺傳修飾的小鼠皮下結締組織細胞，它能夠穩(wěn)定分泌Wnt3A蛋白。目前，還不清楚該細胞是否適合作為小鼠胚胎干細胞培養(yǎng)的飼養(yǎng)層細胞。本研究，使用絲裂霉素C處理L-Wnt3a細胞，并在MTT法的基礎上測定處理后L-Wnt3a細胞的生長狀況，將處理后的細胞用于

2、小鼠胚胎干細胞的培養(yǎng)，并且獲得了該細胞的條件培養(yǎng)基，進一步探討了其在無飼養(yǎng)層條件下對小鼠胚胎干細胞的作用。結果顯示，L-Wnt3a細胞在10μg/ml絲裂霉素C處理4h后，細胞的生長受到了顯著的抑制，但細胞的活力狀態(tài)不受影響。用處理過的L-Wnt3a細胞作為飼養(yǎng)層細胞，成功建立小鼠胚胎干細胞系。用L-Wnt3a細胞的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)ES細胞時，小鼠胚胎干細胞在無飼養(yǎng)層條件下自我增殖能力良好，該條件下培養(yǎng)的ES細胞表達堿性磷酸酶、Oct4、

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