利用滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)檢測端粒酶活性及單核苷酸多態(tài)性.pdf

1、基因組包含著生物體的遺傳信息，基因可以通過復(fù)制把遺傳信息傳遞給下一代，同時將遺傳信息表達(dá)出來?；蛲蛔兣c遺傳性疾病密切相關(guān)，基因突變的檢測對于當(dāng)前基因組學(xué)的研究及臨床診斷等具有重要意義。論文主要以滾環(huán)擴(kuò)增（RCA）反應(yīng)為基礎(chǔ)，結(jié)合磁性分離、分子熒光和共振光散射等技術(shù)建立了端粒酶活性及單核苷酸多態(tài)性（SNP）檢測的新方法。
　　 利用支化滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)（BRCA）建立了檢測端粒酶活性的新方法。根據(jù)端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶的作用，在生物素標(biāo)記的

2、端粒相關(guān)序列的3′端進(jìn)行重復(fù)序列延伸；設(shè)計(jì)短鏈引物與延伸產(chǎn)物完全互補(bǔ)，利用鏈酶親和素與生物素特異性結(jié)合作用，使用鏈酶親和素修飾的磁珠分離延伸產(chǎn)物，然后進(jìn)行熱變性和磁分離，獲得與延伸產(chǎn)物雜交的引物，再以BRCA反應(yīng)將引物擴(kuò)增。加入熒光染料SYBR Green I測定擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號，可達(dá)到檢測端粒酶活性的目的。利用該方法能從20000個肺癌細(xì)胞中檢測出端粒酶活性。
　　 基于支化滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)的原理，結(jié)合共振光散射技術(shù)，建立了SN

3、P檢測的新方法。
　　 突變型DNA與鎖式探針兩端完全匹配，可在連接酶的作用下將鎖式探針連接成環(huán)，引發(fā)BRCA反應(yīng)，產(chǎn)生含有上千個重復(fù)序列的長鏈DNA產(chǎn)物，而野生型DNA與鎖式探針的3′
　　 端存在一個堿基錯配，不能將其連接成環(huán)，因而不能進(jìn)行BRCA反應(yīng)。當(dāng)將BRCA產(chǎn)物加入到強(qiáng)酸介質(zhì)（HClO4）中時，核酸變性聚集成大粒子，產(chǎn)生增強(qiáng)的共振光散射，據(jù)此建立了滾環(huán)擴(kuò)增均相無標(biāo)記共振光散射檢測SNP的新方法。根據(jù)BRCA產(chǎn)