單核苷酸多態(tài)性的電化學(xué)方法研究.pdf

1、基因片段的變異與基因疾病的產(chǎn)生有密切的關(guān)系，其中單核苷酸多態(tài)性(SNPs)是人類基因組中最常見的遺傳變異。因此，SNPs的檢測在遺傳疾病的分子基礎(chǔ)研究、臨床診斷與治療等方面具有重要意義，成為當今分析化學(xué)與生命科學(xué)交叉研究的前沿領(lǐng)域。電化學(xué)分析方法由于其較高的靈敏性和操作簡便的特點，在生命科學(xué)的研究中也得到了廣泛的應(yīng)用。本論文致力于單核苷酸多態(tài)性的電化學(xué)檢測方法研究，完成了三項工作，實現(xiàn)了對目標物的快速、靈敏、準確檢測。主要內(nèi)容如下：

2、 1.結(jié)合DNA連接酶的高忠實性以及鏈親和素堿性磷酸酶的催化作用提出了一種新的SNP基因分型電化學(xué)檢測方法。巰基修飾的捕獲探針和生物素標記的連接探針，與目標序列在合適的條件下雜交，對于完全匹配的雜交體，連接反應(yīng)能夠順利進行，酶催化銀沉積后，通過線性掃描伏安法(LSV)就可以檢測到電化學(xué)信號，對于堿基錯配的情況，連接反應(yīng)不能進行，因此檢測不到電化學(xué)信號，從而達到區(qū)分基因點突變的目的。 2.引物延伸反應(yīng)的高特異性使其成為單核苷酸

3、多態(tài)性(SNPs)基因分型最常用的方法。利用引物延伸反應(yīng)通過二茂鐵標記的dUTP將二茂鐵引入到延伸的產(chǎn)物中去，用一條捕獲探針將延伸產(chǎn)物捕獲到電極表面，用差分脈沖伏安法(DPV)對電極表面的二茂鐵進行檢測，實現(xiàn)SNP基因分型。應(yīng)用該方法對β-地中海貧血28位單堿基突變進行檢測，獲得滿意的基因分型結(jié)果。該方法檢測限可達0.86fM，是一種簡便、快速、靈敏的SNP分型方法。 3.基于第二部分的工作，我們在引物延伸反應(yīng)高特異性的基礎(chǔ)上，