硫代磷酸二乙酯類有機磷農(nóng)藥殘留的免疫學(xué)分析研究.pdf

1、硫代磷酸二乙酯有機類農(nóng)藥是一類應(yīng)用廣泛，毒性較高的有機磷農(nóng)藥，其種類繁多，廣泛應(yīng)用與農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)之中。隨著近年來，有機磷農(nóng)藥大量使用導(dǎo)致的食品安全問題日益顯著，對有機磷農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)的開發(fā)愈顯重要。目前，有機磷農(nóng)藥的檢測的手段多為氣相色譜法、高效液相色譜法和凝膠滲透色譜法等化學(xué)分析方法，這些檢測方法雖然準確性較高，但也往往存在著樣品處理繁復(fù)，對檢測儀器和人員要求較高，檢測成本較高等缺點，對于當前大批量、快速現(xiàn)場檢測有著諸多局限性。

2、本文所研究的酶免疫分析方法正是一種針對有機磷農(nóng)藥殘留的簡便、快速、低成本、大批量的檢測方法。本次研究通過設(shè)計并合成有機磷農(nóng)藥化學(xué)結(jié)構(gòu)設(shè)計小分子半抗原，偶聯(lián)大分子蛋白制備全抗原，進行動物免疫得到抗血清，并以所得抗血清建立四種有機磷農(nóng)藥殘留的酶免疫分析檢測方法。具體工作如下:
　　1、有機磷農(nóng)藥半抗原的合成。參照硫代磷酸二乙酯類有機磷農(nóng)藥具體結(jié)構(gòu)，通過添加間隔臂和活性基團，本文共設(shè)計了7個有機磷農(nóng)藥小分子半抗原Hapten1、Hapt

3、en2、Hapten3、Hapten4、Hapten5、Hapten6、Hapten7，通過直接合成，親核取代及羧基保護等有機化學(xué)方法成功對其進行了合成，并進行了詳細的核磁表征。
　　2、有機磷農(nóng)藥全抗原的制備。以合成的7個小分子半抗原及3個商業(yè)半抗原為原料，通過偶聯(lián)大分子蛋白BSA制備了十個有機磷農(nóng)藥免疫抗原Hapten1-BSA、Hapten2-BSA、Hapten3-B SA、Hapten4-BSA、Hapten5-BSA、

4、Hapten6-BSA、Hapten7-BSA、Hapten8-BSA、Hapten9-BSA、Hapten10-BSA，通過偶聯(lián)單分子蛋白OVA制備了十個有機磷農(nóng)藥包被原Hapten1-OVA、Hapten2-OVA、Hapten3-OVA、Hapten4-OVA、Hapten5-OVA、Hapten6-OVA、Hapten7-OVA、Hapten8-OVA、Hapten9-OVA、Hapten10-OVA，并對所有抗原進行了詳細表征

5、。
　　3、有機磷農(nóng)藥免疫學(xué)分析實驗。用有機磷農(nóng)藥免疫原注射小鼠得到相應(yīng)抗血清，通過對抗血清和包被抗原進行棋盤實驗，得到其最優(yōu)效價組合Hapten4-OVA(1∶4000)和Sera4(1∶8000)、Hapten4-OVA(1∶8000)和Sera6(1∶16000)、Hapten4-OVA(1∶8000)和Sera4(1∶32000)、Hapten4-OVA(1∶8000)和Sera6(1∶32000)，再通過篩選后的抗血清包