濱海白首烏蛋白和多糖的提取純化及其活性功能的研究.pdf

1、濱海白首烏中蛋白質(zhì)和多糖含量豐富，是其具有生物理活性的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，具有較好的研究和開發(fā)的價值。本研究分別提取濱海白首烏中這兩種重要物質(zhì)，對其功能性進(jìn)行全面的分析，以期為其在食品工業(yè)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　本研究對白首烏中的蛋白質(zhì)進(jìn)行提取，評價了其理化性質(zhì)和加工性質(zhì);然后采用響應(yīng)面法優(yōu)化白首烏多糖的提取條件，并對所得粗多糖進(jìn)行純化并分析了白首烏多糖的理化性質(zhì)和體外抗氧化性。具體研究內(nèi)容及實驗結(jié)果如下:
　　首先本研究比較

2、不同溶劑提取法對白首烏可溶性蛋白得率的影響，通過電泳法分析了蛋白的提取效果，同時對白首烏可溶性蛋白進(jìn)行初步表征;采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對提取得到的白首烏蛋白進(jìn)行鑒定:大豆分離蛋白作為對照，對白首烏蛋白的加工特性進(jìn)行分析。結(jié)果表明:PBS法提取白首烏蛋白優(yōu)于傳統(tǒng)的堿液提取和Tris-HCl法提取;白首烏蛋白的分子量主要分布在348 kDa左右，另一條相對遷移率較低、分子量在700 kDa附近的條帶推測為其聚集體，白首烏蛋白分子主要由一種亞

3、基（分子量為28 kDa）構(gòu)成:白首烏蛋白具有良好的加工性能，特別是持油性、乳化性及乳化穩(wěn)定性和起泡性，均好于大豆分離蛋白，白首烏蛋白的溶解性與大豆分離蛋白的溶解性隨pH變化趨勢基本一致。
　　實驗選擇對料液比、提取溫度和提取時間3個因素進(jìn)行單因素試驗。根據(jù)單因素試驗結(jié)果設(shè)計中心組合試驗，以多糖得率為響應(yīng)值，采用響應(yīng)面分析法獲得白首烏多糖的最優(yōu)工藝參數(shù)。結(jié)果表明，白首烏多糖的最優(yōu)提取工藝為料液比1∶17、提取溫度為91℃、提取時間

4、為3h。在此條件下，白首烏多糖得率為1.58％，與模型的預(yù)期值1.61％基本相符。
　　白首烏多糖提取液經(jīng)過酶法去淀粉、Sevge法去蛋白、95％的乙醇沉淀后，再經(jīng)過透析和凍干后得到不含有核酸和蛋白質(zhì)粗多糖。經(jīng)過DEAE-Sepharo Fast Flow陰離子交換色譜和葡聚糖G-150凝膠色譜柱色譜對白首烏多糖進(jìn)行了分級分離，最終得到一個純化組分。通過HPGPC測定其相對分子質(zhì)量為830.93 KDa。采用PMP柱前衍生化法分析

5、白首烏多糖的單糖組成，結(jié)果表明白首烏多糖主要是由半乳糖醛酸、半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸和甘露糖組成，其摩爾比為甘露糖∶鼠李糖∶葡萄糖醛酸∶半乳糖醛酸∶半乳糖∶阿拉伯糖=0.058∶0.280∶0.071∶1.455∶0.918∶0.469。
　　采用4種抗氧化活性測定的方法，對濱海白首烏抗氧化清除自由基能力進(jìn)行分析和研究，結(jié)果表明:白首烏多糖具有一定的清除DPPH自由基、超氧自由基、ABTS+·自由基能力，并且隨著多糖的

6、濃度增加，清除率逐漸增高。清除DPPH自由基、超氧自由基、ABTS+·自由基能力的IC50分別為0.5543 mg/mL、0.5881 mg/mL和0.1232mg/mL，其中清除ABTS+·自由基能力較強，與VC相接近;白首烏多糖的ORAC值為109.94μmolTrolox/g，表明白首烏多糖具有較強的抗氧化能力。
　　最后，通過建立TNF-α誘導(dǎo)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)模型，來研究白首烏多糖的抗氧化性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，