乳制品中蛋白質(zhì)RP-HPLC指紋圖譜的建立及其在乳源分析和乳制品質(zhì)量控制中的應(yīng)用.pdf

1、乳中的蛋白質(zhì)是乳質(zhì)量評價的重要指標(biāo)之一，關(guān)乎著乳的營養(yǎng)價值，建立合理穩(wěn)定的乳蛋白評價方法對于乳質(zhì)量評價具有重要的意義。本論文通過反相色譜法建立了乳蛋白的指紋圖譜，進(jìn)而用來檢測不同來源的乳中的蛋白質(zhì)，對乳源進(jìn)行差異性分析。
　　首先，建立了反相色譜分析乳蛋白的方法?？疾炝酥鶞亍⒘魉?、梯度、波長等對乳蛋白RP-HPLC分離的影響，對RP-HPLC分離乳蛋白的條件進(jìn)行優(yōu)選。對方法進(jìn)行了重復(fù)性和精密度驗證，重復(fù)性和中間精密度實驗表明，峰保

2、留時間RSD％分別在0.04％～1.36％和0.38％～1.33％;峰面積RSD％分別在5.22％～15.04％和8.27％～30.73％。線性擬合了五種乳蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，R2在0.990～0.999之間。通過κ-CN、α-CN、β-CN、α-la、β-lgB五種乳蛋白標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時間的測定，確定了牛乳樣品中的主要蛋白質(zhì)。
　　其次，對不同來源的牛、綿羊和山羊奶蛋白質(zhì)進(jìn)行分析。對牛奶中的蛋白質(zhì)進(jìn)行RP-HPLC分析，通

3、過乳蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線測定了牛乳樣品中的五種主要蛋白質(zhì)。對羊奶中的蛋白質(zhì)進(jìn)行RP-HPLC分析，以比較不同來源的乳蛋白各組分在種類或含量上的差異。進(jìn)一步通過SDS-PAGE比較了不同來源牛、羊奶中蛋白質(zhì)的分子量和含量，通過BCA法測定了牛、羊奶中總蛋白的含量。
　　最后，分別建立牛、羊奶蛋白質(zhì)的指紋圖譜。進(jìn)行乳蛋白指紋圖譜相似度分析，六批牛乳間的相似度在0.981～0.998;七批山羊乳間的相似度在0.721～0.989;兩批綿羊乳間的

4、相似度在0.996;在摻入羊乳的牛乳摻假樣品中，牛、綿羊、山羊乳樣品與摻假乳樣品的相似度在0.578～0.887。對不同來源乳樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行主成分分析，牛、綿羊、山羊三種乳樣品歸到三個大類;在同一大類中，不同來源蛋白質(zhì),各個樣品點之間具有一定的分散。在摻入羊乳的牛乳摻假樣品中，樣品點的分布遠(yuǎn)離牛、羊乳樣品的大類，可以鑒別出乳制品的摻假。
　　綜上所述，本論文建立了穩(wěn)定的乳蛋白RP-HPLC分析方法，得到具有代表乳樣品個體性和整