穩(wěn)定同位素碘標記-ICP-MS在免疫分析中的應(yīng)用.pdf

1、隨著生命科學(xué)的進步，免疫分析法獲得了不斷的發(fā)展。近來，電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)在免疫分析中成為人們關(guān)注的一個檢測手段。由于電感耦合等離子體質(zhì)譜具有靈敏度高、檢出限低、線性動態(tài)范圍寬、干擾較少等優(yōu)點，并可以進行多元素同時快速分析，因此在高通量的生物免疫檢測方面具有廣泛的應(yīng)用前景。本工作中研究了穩(wěn)定同位素碘標記蛋白技術(shù)，建立了電感耦合等離子體質(zhì)譜免疫碘標記蛋白分析方法，并將該法應(yīng)用到特異性免疫蛋白檢測和致病性菌檢測中。論文共有四

2、個部分組成：1.文獻綜述；2.穩(wěn)定性同位素碘標記蛋白；3.碘-127標記-電感耦合等離子體質(zhì)譜用于免疫分析；4.蒸氣發(fā)生-電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定碘。 第一章通過文獻綜述介紹了免疫分析方法的發(fā)展狀況及其在各領(lǐng)域的應(yīng)用，闡述了免疫分析的標記方法及進展，并對免疫分析發(fā)展趨勢作了扼要論述，突出了電感耦合等離子體質(zhì)譜在免疫分析應(yīng)用中的可行性。 第二章研究穩(wěn)定性同位素碘-127 標記蛋白的方法。介紹了不同的碘標記方法及其發(fā)展情況

3、，并對各種碘的標記方法進行了比較；研究中采用溴代琥珀酰亞胺法實現(xiàn)非放射性碘-127對蛋白的標記：溴代琥珀酰亞胺是一種比較溫和的氧化劑，并在均相中進行反應(yīng)，標記反應(yīng)步驟簡便，標記率高、標記物穩(wěn)定、活性好，實驗證明是一種理想的碘標記方法。 第三章主要介紹了穩(wěn)定性碘標記-電感耦合等離子體質(zhì)譜用于免疫蛋白分析。研究中首先以兔抗大腸桿菌為抗原，羊抗兔IgG蛋白為抗體，對羊抗兔IgG蛋白進行碘標記，然后進行免疫反應(yīng)，以電感耦合等離子質(zhì)譜進行

4、檢測，建立了免疫蛋白檢測的碘-127 標記-電感耦合等離子體質(zhì)譜免疫分析法。另外，對免疫微孔板進行了修飾實驗；建立檢測前碘標化合物的處理方法，防止碘的揮發(fā)和碘的記憶效應(yīng)。最后，使用該方法對致病性菌的免疫蛋白分析作了嘗試，獲得一定理想的效果。 第四章主要建立了一種在線化學(xué)蒸氣發(fā)生-電感耦合等離子體質(zhì)譜測定碘的方法，利用碘負離子的還原性，采用氧化還原手段，將碘負離子氧化為碘單質(zhì)；然后通過碘單質(zhì)的易揮發(fā)特點，將碘蒸氣直接導(dǎo)入等離子體。

5、即采用化學(xué)蒸氣發(fā)生法(Chemical Vapour Generation)進行進樣，與傳統(tǒng)的霧化進樣相比，能更有效地引入樣品，提高了樣品傳輸效率和檢測靈敏度。該方法的建立還對碘的形態(tài)作了嘗試，對碘負離子和碘酸鹽進行檢測。 本研究工作的創(chuàng)新點： 1.為電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測法與免疫方法相結(jié)合完成了非放射性碘127標記蛋白的研究。實驗中采用溴代琥珀酰胺(NBS)法，實現(xiàn)了穩(wěn)定性同位素碘標記蛋白方法的建立；方法采用非放射碘

6、標記，克服了傳統(tǒng)方法中碘放射性對操作者帶來的危害和困難等。 2.將電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測法與免疫方法相結(jié)合，建立了免疫蛋白檢測的碘-127標記-電感耦合等離子體質(zhì)譜免疫分析法，并實現(xiàn)該方法在特異性免疫蛋白檢測和致病菌檢測中的應(yīng)用。 3.建立一種在線化學(xué)蒸氣發(fā)生-電感耦合等離子體質(zhì)譜測定碘的方法。即采用化學(xué)蒸氣發(fā)生法(Chemical Vapour Generation)進行進樣，能更有效地引入樣品，提高了樣品傳輸效率和