基于酶循環(huán)放大的表面增強拉曼光譜技術在腫瘤標志物檢測中的應用研究.pdf

1、本論文主要采用表面增強拉曼光譜檢測技術，基于核酸適體與目標分子的特異性結合作用，結合鏈置換循環(huán)放大反應技術及DNA酶切循環(huán)放大技術，利用納米金生物條碼技術，建立了DNA、溶菌酶和腫瘤細胞等多種生物活性分子的高靈敏度、高選擇性的傳感分析檢測的新方法，并為對其它生物分子的檢測提供基礎性研究資料。本論文的研究內容主要包括以下幾個方面:
　　1.本實驗將內切酶循環(huán)放大與鏈置換循環(huán)放大反應相結合構建了一種表面增強拉曼光譜檢測DNA的新方法。

2、以金片為檢測基底，拉曼信號標記的金納米顆粒為檢測探針，實現(xiàn)了DNA的高靈敏、高選擇性檢測。該方法通過靶DNA引發(fā)內切酶循環(huán)放大及鏈替換循環(huán)放大反應，在金基底上產生大量的拉曼探針，使拉曼信號顯著增強，而且實驗中使用磁性納米微球，進行磁性分離，有效降低了背景信號值，在定量檢測目標DNA時，檢測限達2.7×10-14M，該方法操作簡便、靈敏度高、選擇性強、適用范圍廣，通過簡單的改變DNA序列可用于其他代謝物、蛋白質，以及生物輔助因子的檢測。<

3、br>　　2.本實驗基于適體與靶蛋白質的特異性識別作用，結合酶循環(huán)放大技術，提出了靶向激活源頭放大SERS檢測溶菌酶的新方法。該方法通過溶菌酶對適體的靶向識別，引發(fā)了溶菌酶的聚合替換循環(huán)放大和DNA鏈聚合剪切循環(huán)放大，從而得到大量的與溶菌酶含量相關的帶有拉曼信號標記的磁珠-納米金生物條碼探針復合物，采用表面增強拉曼光譜(SERS)實現(xiàn)對較低濃度溶菌酶的高靈敏度檢測，檢測限可達8.3×10-15M，為溶菌酶提供了一個更加簡便、快速、高靈敏

4、度檢測的途徑，該方法還具有廣泛的適用性，在其它蛋白質及腫瘤標志物的檢測領域具有廣闊的應用前景。
　　3.本體系構建了一種新型的基于工具酶循環(huán)放大SERS檢測Romas細胞的方法。通過適體DNA對配體細胞表面蛋白質的高強度特異性結合，引入酶切循環(huán)放大的方法放大待測拉曼分子信號，并通過金基底，納米金生物條碼等將信號進一步加強。最終實現(xiàn)具有高靈敏度和高選擇性的對靶DNA和淋巴瘤Ramos細胞的檢測。該方法對靶DNA和淋巴瘤Ramos細胞