標準的pcr實驗室建設(shè)方案

1、標準的 準的 PCR PCR 實驗室建設(shè)方案 實驗室建設(shè)方案一、主體結(jié)構(gòu)主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合 金 50 內(nèi)圓角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu) 牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。二、標準的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)將 PCR 過程分成試劑準備、標本制備和 PCR 擴增檢測三個獨立 的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設(shè)置有 緩沖區(qū)， 同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié)，使整個 PCR 實驗過

2、程中試劑和標 本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。可打開緩沖區(qū)Ⅰ，緩沖區(qū)Ⅱ和 PCR 擴增區(qū)的排風扇往外排氣， 在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風量可調(diào)的回風口，空氣通 過回風口向室內(nèi)換氣。三、消毒在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈 ，供消毒用。在試劑準備區(qū)和標本制備區(qū) 還設(shè)置移動紫外線燈，對實驗桌進 行局部消毒。四、機械連鎖不銹鋼傳遞窗試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式） 傳遞窗

3、傳遞，保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染（人物分流） 。五、地面地面建議使用 PVC 卷材地面或自流坪地面，整體性好。便于進 行清掃，耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚 （至少 800mm×800mm）接縫需要小于 2mm。 六、照明燈具要選用凈化燈具，能達到便于清洗、不積塵的特點。在建設(shè)的過程中應(yīng)注意： 在建設(shè)的過程中應(yīng)注意：（1）規(guī)范的安裝流程和全面的服務(wù)流程。（2）嚴格按照規(guī)范科學設(shè)計的安裝流程。（

4、3）安裝前需要確定以下安裝條件，如：電源電壓，電源進線 位置，電話網(wǎng)絡(luò)線進線位置，進水水壓，最小安裝空間，地面平整 度，通風孔、進水管和下水管的位置等，理想狀態(tài)的空間尺寸和通 風口尺寸。PCR 實驗室并沒有嚴格的凈化要求，但是為避免各個實驗區(qū)域 間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時，要 嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。 3.1 試劑貯存和準備區(qū)該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主 反應(yīng)

5、混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū) ，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi) 制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴格的要求。 3.2 標本制備區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提 取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定 RNA 時 cDNA 的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰 近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會

6、發(fā)生 氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。 3.3 擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為 DNA 或 cDNA 擴增。此外，已制備的 DNA 模板和合成的 cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來 自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。在巢 式 PCR 測定中，通常在第一輪擴增后必須打開反應(yīng)管，因此巢式擴 增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于

7、鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶 膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的 不必要的走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。3.4 擴增產(chǎn) 物分析區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉 分析儀器檢測，此區(qū)域可不設(shè)。本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的 要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其 它區(qū)域。 4 污染的預(yù)防與控制PCR 實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染。在實際