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1、MicroRNA(miRNA)是一類長(zhǎng)度為18-23個(gè)堿基的內(nèi)源性、非編碼RNA,它與真核細(xì)胞的基因調(diào)控有著重要的關(guān)系。研究表明,miRNA參與了疾病發(fā)生發(fā)展過程中的信號(hào)調(diào)節(jié),并且miRNA的異常表達(dá)與癌癥,神經(jīng)系統(tǒng)疾病及糖尿病等多種疾病有著緊密的聯(lián)系。作為一種新型的生物標(biāo)志物,miRNA具有長(zhǎng)度短、豐度低及家族同源性高等特性,使得臨床上實(shí)現(xiàn)高靈敏檢測(cè)miRNA面臨著巨大的挑戰(zhàn)。因此,建立高靈敏的miRNA定量分析方法是目前亟需解決的難
2、題。
本課題建立了一種基于T7核酸外切酶“信號(hào)關(guān)閉”的策略,在均相體系中成功實(shí)現(xiàn)了對(duì)miRNA的可視化檢測(cè)。在無靶物質(zhì) miRNA存在時(shí),單鏈捕獲探針無法被T7核酸外切酶剪切,打開含有G4序列的發(fā)夾結(jié)構(gòu)探針,吸光度達(dá)到最大值;在靶物質(zhì)miRNA存在時(shí),miRNA與捕獲探針雜交形成DNA/RNA雙鏈,利用T7核酸外切酶,剪切雙鏈中的捕獲探針,使得捕獲探針濃度大大減小,被打開的發(fā)夾探針數(shù)量減少,從而導(dǎo)致信號(hào)降低。在最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)條件下
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