2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩2頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、· 2 5 6 ·免 疫 學(xué) 雜 志 第 2 l 卷 第 3 期 2 0 0 5 年 5 月I M M U N O L O G I C A LJ O U R N A LV o 1 . 2 1N o .3M a y2 0 0 5[ 文章編號] 1 0 0 0 . 8 8 6 1 ( 2 0 0 5 ) 0 3 — 0 2 5 6 — 0 3N o g o . 6 6融合蛋白的原核表達(dá)及鑒定 謝 琳h , 賀翔鴿h ,

2、蘇踴躍 , 陳渝 , X i n — f uZ H O U 2 ( 1 . 第三軍醫(yī)大學(xué) a . 大 坪醫(yī)院眼科, 重慶4 0 0 0 4 2 ;b . 西南醫(yī)院全軍燒傷研究所, 重慶 4 0 0 0 3 8 ; 2 . 澳大利亞 Hi n d e r s 大學(xué)人 類生理 學(xué)系神經(jīng)科 學(xué)中心 , 阿德萊德 ,南澳大利亞 5 0 0 1 )[ 摘 要]目的 原核表達(dá)軸突再生抑制蛋白N o g o - 6 6 , 并對其進(jìn)行鑒定。方法 采用

3、聚合酶鏈反應(yīng)方法從含 N o g o - 6 6 編 碼序列的質(zhì)粒 D N A中擴(kuò)增出 N o g o - 6 6 基因開放閱讀框, 構(gòu)建原核表達(dá)載體, 轉(zhuǎn)化大腸桿菌 , 異丙基 p D . 硫代半乳糖苷( I P T G ) 誘 導(dǎo)表達(dá), 裂解細(xì)菌抽提蛋白, 表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳( S D S - P A G E ) 、 We s t e r n 免疫印跡鑒定。結(jié)果 測序鑒定 N o g o - 6 6開放閱讀框成功插入

4、p E T - 4 6. E K / L I C 質(zhì)粒; 重組質(zhì)粒在大腸桿菌中成功表達(dá)大鼠 N o g o - 6 6蛋白, S D S - P A G E測定其相對分子質(zhì) 量() 約 70 0 0 , W e s t e r nB l o t 結(jié)果證實表達(dá)產(chǎn)物融合有聚組氨酸標(biāo)簽。結(jié)論 應(yīng)用原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了 N o g o - 6 6 蛋白, 為 下一步制備 N o g o - 6 6 蛋白疫苗及疫苗功能研究打下了基礎(chǔ)。[ 關(guān)鍵詞

5、] N o g o - 6 6 ; 原核表達(dá); 融合蛋白[ 中圖分類號] R 3 1 8[ 文獻(xiàn)標(biāo)識碼] AI d e n t i f i c a t i o na n dp r o k a r y o t i ce x p r e s s i o no fNo g o - 6 6X I EL i n h , H EX i a n g . g e h , S UY o n g . y u e,C H E NY u, X i n . f

6、uZ H O U( 1 a . D e p a r t m e n to fO p h t h a l m o l o g y ,D a p i n gH o s p i t a l , l b . S t a t eK e yL a b o r a t o r yo f T r a u m a , B u r n sa n dC o m b i n e dI n j u r y, I n s t i t u t eo fB u r n

7、 s , S o u t h w e s th o s p i t a l ,T h i r dMi l i t a r yM e d i c a lU n i v e r s i t y ,C h o n g q i n g4 0 0 0 4 2 ,C h i n a ; 2 .D e p a r t m e n to f H u m a nP h y s i o l o g ya n d C e n t r ef o rN e

8、u r o -s c i e n c e , F l i n d e r sU n i v e r s i t yo f S o u t hA u s t r a l i a , A d e l a i d e5 0 0 1 , A u s t r a l i a)[ A b s t r a c t ]O b j e c t i v eT oe x p r e s sa n di d e n t i f yr a tN o g o -

9、6 6p e p t i d ei nE . c o l i . Me t h o d sT h eo p e nr e a d i n gf r a m eo fr a tN o g o - 6 6w a sa m p l i f i e db yP C R u s i n gD NAv a c c i n ea sp l a t e .t h e ni tWa s i n s e r t e d i n t oP E T -

10、4 6 一 E K / L I Cv e c t o r .R e c o mb i n a n tp l a smi dW a s i d e n t i f ie d b yc do n yP C Ra ndt r a n s f o r m e d i n t oB L 2 1 ( D E 3 )p L y s S , a ndt h e ni n d u c e d b yI F F Gi n3 7℃ i n c u b

11、 a t i o n . 1 h ee x p r e s i o np r o d u c tw a s a na l y z e db yS D S -P A G Ea n dW e s t e r nb l o t t i n g .Re s u l t sT h er e c o mb i n a ntp l a s mi dW a s c o n s t r u c t e d s u c c e s s f u l

12、l y ,a ndt he nv e r i f i e d b ys e q u e n c i n g .T h ee x p r es s e dp r o t e i n s i nE . c o l ima i n l ye x i s ti ns u p e ma t a n t .T h eNo g o - 6 6f u s i o np r o t e i no fM 70 0 0W a s c h a r a

13、c t e r i z e db y6×h i st a g .Co n c l u s i o nR a tN o g o - 6 6p r o t e i ni ss u c c e sf u l l ye x p r e s s e di nE . c o l is y s t e m,w h i c hp a v e sawa yf orp r ep a r a t i o no fv a c c i n ef orN

14、o g o - 6 6a n df orr e l a t e d f u n c t i o nr e s e a r c h.1 K e yw o r d s ] N o g o - 6 6 ; P r o k a r y o t i ce x p r e s s i o n ; F u s i o np r o t e i n成年哺乳動物 外周神經(jīng) 系統(tǒng)損傷后 可有效再 生 , 但中樞神經(jīng)系統(tǒng) ( C N S ) 損傷后 , 受

15、損 神經(jīng)元軸突 的再生能力卻極 為有 限, 主要原 因是 由于髓磷脂抑 制物 ( M y e l i ni n h i b i t o r s ) 的存在 , 這些分子均能誘導(dǎo)生 長錐塌陷, 從而導(dǎo)致軸突再生失敗 。2 0 0 0 年 , 美 國、英國、 瑞士的 3 個實驗室同時克隆出 N o g o 基 因—— 抑制受損神經(jīng)再生 的基 因, 為中樞神經(jīng)損傷修 復(fù)的研究 帶 來 了 突 破 性 進(jìn) 展 - 3 1 。N o g o的

16、3個 異 構(gòu) [ 收稿日 期] 2 0 o 4 —1 2 — 3 1 ; [ 修回日 期] 2 0 0 5 ~ 0 3 — 0 4[ 基金項目] 重慶市科委 自然科學(xué)基坌資助項目( C S T C , 2 0 0 4 B B 5 0 3 2 )[ 作者簡介] 謝 琳( 1 9 6 6 一) , 女, 重慶市人, 副教授、 副主任 醫(yī)師, 博 士生, 主要從事白內(nèi)障、 青光眼視神經(jīng)保護(hù)方面的研究。() 0 2 3 . 6 8 7 5 7

17、3 4 1 ;( E . m a i l ) x i e l i n 7 9 3 @s o h u . c o Ⅱ l體 ( N o g o . A、 N o g o . B 、 N o g o . C ) 中都可 檢測到一個 完全 獨(dú)立的具有抑制活性 的結(jié)構(gòu)域 N o g o . 6 6 。針對 N o g o蛋 白的生物學(xué)功能 , 以拮抗 N o g o 蛋 白為出發(fā)點(diǎn) 的神 經(jīng)再生研究近年逐漸增多, 本研究擬應(yīng)用 p E T (

18、P l a s .m i df o rE x p r e s s i o nb yT 7R N Ap o l y m e r a s e ) 系統(tǒng)對 N o g o .6 6 進(jìn)行原核表達(dá), 將 表達(dá) 出的 目的蛋 白進(jìn)行分析鑒 定, 為下一步制備 N o g o . 6 6 蛋白疫苗及疫苗功能研究 打下基礎(chǔ)。1 材料 與方法 1 . 1 質(zhì)粒和試劑 疫苗質(zhì)粒( p D N Av a c c i n e ) 為澳大 利亞 H i n d

19、 e r s 大學(xué)周新富教授惠贈 , 含有大 鼠 N o g o .6 6 全長 c D N A序列 , P y r o b e s tD N A聚合酶購 自T a k a r a公 司, 凝膠 回收試劑盒和質(zhì)粒抽提試劑盒為 O m e g a維普資訊 http://www.cqvip.com 2 5 8免 疫 學(xué) 雜 志 第 2 1 卷 M ) Mc M a r kp r ot e i nn x a r k e , ;1 ) L ?

20、 ~t etELw i f i , Wr G lt l o n ; 2 )IIErw I I k【 I P lL n“ } l 哪 田 3W e s i e r n ( 3 l o t 鑒 定表達(dá)產(chǎn)插 E3D e l e c t i o no fe x p r e s s i o np “ dL l n b yWe s t e r n b h : l t t i n g明確的髓磷脂抑制物有 M A G ( M y e l i n .

21、 a s s o c i a t , : x lg l y c ~ 一p mt e i n ) 、 O M g p( O [ i g C N l e n d mc y U e — m y e l i n() p r o t e i n ) 、N ( t g o 等. 這些分子均能誘導(dǎo)生長錐塌陷,從而導(dǎo)致 軸突再生失敗 . N o g t有 3個異構(gòu)體 ( N o一 A 、 N · 輯 B 、 N o 印 一 c ) , 主要

22、分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng) 白質(zhì)中, 在髓 鞘和培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞中可以檢測到, 它們可以使生長錐塌陷并抑制神經(jīng)生長一N o g o 蛋 白碳端和氮端在膜內(nèi). 中段6 6個氨基酸殘基形成膜外的拓?fù)浣Y(jié) 構(gòu), 該段拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)是 N o g o 蛋白神經(jīng)抑制活性的結(jié)構(gòu) 基礎(chǔ) . 研究人員將其命名為: N o g o 一 6 6。率研究采用 p E T系統(tǒng) 對 N o g o - 6 6片段進(jìn)行表 達(dá), 該系統(tǒng)是目前直用最為廣泛的原核表達(dá)系統(tǒng)之 一當(dāng) 目

23、的基因被克隆到表達(dá)載體 上后. 受 噬菌體 T 7強(qiáng)轉(zhuǎn)錄及翻譯 信 號 控制 , 在 [ P T G充分誘導(dǎo) 下, 幾 乎所有細(xì)胞都可 應(yīng)用 于表 達(dá) 目的蛋 白我們 應(yīng)用 P C R方 法 , 以 c 1 ) N Av a ~ . ~ , i n e為 模 板, 成 功 擴(kuò)增 了N o g o - 6 6 編碼區(qū)序列, 插入原核表達(dá)載體p E T4 6 E K /U C , 轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌 B I . 2 l ( ~ D F 2 ,

24、) p L Y s S , 在 1 P T ℃誘 導(dǎo)下, 獲得 約 70 0 0的小分子多豚 同時發(fā)現(xiàn).原桉表達(dá)獲得的 N o g o - 6 6 蛋自主要以可溶性方式存 在于表達(dá)細(xì)菌的上清液和細(xì)胞質(zhì)中,超聲破碎細(xì)菌 后, 裂解液中可以檢測到較高水平的目的蛋白, 結(jié)合 分子質(zhì)量和抗 聚組氨酸抗體免疫反應(yīng)特異性 , 可 認(rèn)為該蛋白為 N o6 6 多肽 胞質(zhì)表達(dá) 的可溶 性蛋 白通常具有天然構(gòu)象與活性 . 為下游多肽的功能分 析以及神經(jīng)

25、保護(hù)實驗研究奠定 r基礎(chǔ)、[ 參考文獻(xiàn)][ 1I(nM s . H 1 ]r ^ B . v l t n { k 1 . H a a tM E . e l {、 ‘¨ _ A;at u y e f i n - a s s ~ x ' i a t e dn e u r i t e。 u t g _ T j n 1 hi n h i l f i l o ra nc Ia na mi g e nrr r t o n o c

26、] o la n t i F x x t yI N - 】 JJ .N a t u r e . 2 1 1 3 0 .4 0 3t 67 6 8 ) :4 3 4—4 3 92 ( ; r a n d P r eT.Na km蛐 F .、 1 a r t ar f i a nT,e t¨.- n t / f i [ a t i o , io ft h eN o g oi n h i b i t o rn f ~ X U [ L

27、r e g . e n e r a t [ o n㈣ R e t i ~ u l o nrt e l n[ J ] N a l t t r e . 2 0 ( 1 0 . 4 0 3c 67 6 8: 4 3 9 一.1 3 ] ( k , l d h e . r gJ 1. B a r r e sB A、 I _li nIr Y, ' e . g er t e r a t i 一 ?JN a t u r e , 2 O 0 0

28、 , 4 0 3 ( 67 6 8 ) : 3 6 9 —3 7 0 .[ 4 ] S a m h r o : , kJ . R u sD W, R u s ~ L 【 I ) M o l e c u l a rC l ~ n J n g : AL a b o r a t o ~M a n u a ll MJ . 3 r do l i t i , ir lU S A : L ¨ 9 Jc IS p r i n gI {一b o

29、 rL a b o r a t o r yP.舢 : 8 8 0—8 9 4[ 5H u a ~ gD W. 、 1 c K e r m c h e rl 1B r a u nP E .口 , . Af l l e r aF ~ u t i <a (i n ep fh【 I Js t i m u l a t ea¨ lr e ~ e n e r a t h , ni nt h ea d u hm a n m ~ a i

30、i a ns pIo n t 【 I . N e u r o n1 9 9 9 , 2 4 l3J : 6 3 9 —6 4 7 .[ 6” a sP S . C l n t k a r aR K . P E q “ ~ 4 / 1 1 IS P E L q “ l i i 【 I 1 .r r n T 1 a ;-n v e n to fl “ n gc( 一[ J ] ( ' u r rO p i nP u l mM e d

31、 , ~ X E ' 2 . 8 ( 4 ) :2 5 7—2 6 4.( 編輯 羅承麗)歡迎郵購 2 0 0 4 年《 免疫學(xué)雜志》 增刊《 免疫學(xué)雜志~ 2 0 0 4 年增- T I 】 , 為 A 4 開本 1 7 5頁, 內(nèi)客豐富, 信息量大, 以綜述為主 , 并有少量論著 其主要 介紹近年來免疫學(xué)及其相關(guān)學(xué)科研究的最新進(jìn)展, 適合免疫學(xué)及相關(guān)學(xué)科的研究人 、 醫(yī)務(wù)工作者、 在校本 科生、 研 究生參閱每本 3 0元(

32、 含郵資)另騙輯部存 有部分 2 0 0 0 、 2 0 0 I 、 2 0 0 2和 2 0 0 3 年增刊, 2 0 0 0 年每本l 7 元, 2 0 0 1 年每本 2 3 元, 2 0 0 2 年每本 3 0 元, 2 0 0 3 年每本 3 O 元( 以上介格均含郵資) . 欲購者, 請從郵局匯款,編輯部收款后 即可寄書和收據(jù) . . 匯款時務(wù)必注明郵購哪年增刊郵購地址: 重慶市沙 t 壩 區(qū)高灘巖《 免疫學(xué)雜志》 編輯部

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論