2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、背景:膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)在神經(jīng)損傷的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要作用。 目的:對(duì)GFAP進(jìn)行基因克隆,構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒并加以鑒定。 設(shè)計(jì)、時(shí)間及地點(diǎn):?jiǎn)我粯颖狙芯?,?008-09/11上海市長(zhǎng)征醫(yī)院神經(jīng)外科實(shí)驗(yàn)室完成。 材料:中間載體pGEM-T Easy質(zhì)粒購(gòu)于Promega公司,原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-2由上海市長(zhǎng)征醫(yī)院神經(jīng)外科實(shí)驗(yàn)室保存。 方法:從人腦膠質(zhì)瘤組織提取mRNA,采用RT-P

2、CR的方法擴(kuò)增GFAP序列并表達(dá),然后與載體pGEX-4T-2連接,轉(zhuǎn)化宿主菌BL21構(gòu)建重組質(zhì)粒,誘導(dǎo)表達(dá)后純化,Western-blot鑒定。 主要觀察指標(biāo):總RNA鑒定結(jié)果,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物分子質(zhì)量的鑒定,重組表達(dá)載體的酶切鑒定,Western-blot鑒定。 結(jié)果:目的載體構(gòu)建完成后,用雙酶切、DNA測(cè)序與Western-blot的方法證實(shí)原核表達(dá)載體構(gòu)建成功。 結(jié)論:pGEX-4T-2-GFAP原核表達(dá)載

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