蜜環(huán)菌液態(tài)發(fā)酵工藝及HPLC指紋圖譜的研究.pdf

1、蜜環(huán)菌是藥食兼用的真菌，具有豐富的營養(yǎng)和藥用價(jià)值，被廣泛應(yīng)用于開發(fā)保健品、功能性食品以及藥品。蜜環(huán)菌液態(tài)發(fā)酵是實(shí)現(xiàn)連續(xù)化、大規(guī)?；a(chǎn)的有力保障，但蜜環(huán)菌存在發(fā)酵周期過長、工業(yè)化研究較少以及質(zhì)量控制不規(guī)范等問題。本文通過對(duì)蜜環(huán)菌分割發(fā)酵、補(bǔ)料發(fā)酵、工業(yè)化生產(chǎn)以及HPLC指紋圖譜進(jìn)行了研究，有效的改善了上述問題，對(duì)蜜環(huán)菌的應(yīng)用開發(fā)有重要意義，主要結(jié)果如下：
　?。?）分割發(fā)酵時(shí)，蜜環(huán)菌種子液培養(yǎng)最優(yōu)時(shí)間為第8 d，此時(shí)菌絲量為29.

2、16 g/L；當(dāng)分割比例為10％、20%、30%、40%以及50%時(shí)，最優(yōu)培養(yǎng)時(shí)間分別為8 d、6 d、5 d、5 d、4 d，且此時(shí)的菌絲量分別為30.45 g/L、28.84 g/L、30.09 g/L、29.02 g/L、27.10 g/L；最優(yōu)分割比例為30%，培養(yǎng)時(shí)間為5 d，能連續(xù)分割培養(yǎng)2次；通過對(duì)搖瓶補(bǔ)料發(fā)酵進(jìn)行研究，結(jié)果表明補(bǔ)料發(fā)酵更加有利于蜜環(huán)菌前期菌絲量的積累。
　?。?）對(duì)蜜環(huán)菌進(jìn)行8代傳代培養(yǎng)，蜜環(huán)菌生長

3、活力未受影響，適合工業(yè)化生產(chǎn)。50 L發(fā)酵罐培養(yǎng)8 d，菌絲量可達(dá)26.80 g/L。200 L發(fā)酵罐進(jìn)行種子培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為160 r/min，培養(yǎng)初期通氣量為0.47 vvm，72 h后通氣量為0.80 vvm，培養(yǎng)6 d，其菌絲量為15.35 g/L，此時(shí)可轉(zhuǎn)入下一級(jí)培養(yǎng)；2 m3發(fā)酵罐發(fā)酵采用補(bǔ)料發(fā)酵的方式，28℃培養(yǎng)，補(bǔ)料期間轉(zhuǎn)速為50 r/min，72 h后轉(zhuǎn)速為80 r/min，通氣量為0.47 vvm，發(fā)酵培養(yǎng)8 d時(shí)，其菌

4、絲量可達(dá)22.65 g/L，當(dāng)蜜環(huán)菌發(fā)酵液顏色變?yōu)榧t褐色，pH開始上升，菌絲生長緩慢，即可終止發(fā)酵。
　?。?）HPLC指紋圖譜液相條件：色譜柱為Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫（0~5 min，10%~10%A；5~35 min，10%~30%A；35~60 min，30%~70%A；60~75 min，70%~