洋槐蜂蜜HPLC指紋圖譜的研究.pdf

1、蜂蜜是一種傳統(tǒng)的天然保健食品，其中含有糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、微量元素、有機(jī)酸、色素、蜂花粉、激素、微量活性成分等。蜜源不同，蜂蜜中的各種組分和含量不同；即使是同一種類的蜂蜜，由于受氣候條件、土壤性質(zhì)、養(yǎng)蜂技術(shù)等諸多環(huán)境因素的影響，也極少出現(xiàn)有完全相同成分和相同含量的分析結(jié)果。因此，可以根據(jù)蜂蜜中有效成分的種類和含量的差異，建立蜂蜜質(zhì)量控制方法。本文將HPLC指紋圖譜技術(shù)應(yīng)用于洋槐蜂蜜中糖類物質(zhì)和黃酮類化合物的分析，擬建立一種科學(xué)

2、、高效、準(zhǔn)確的蜂蜜種類鑒別和質(zhì)量控制的檢測方法。 洋槐蜂蜜的糖類化合物HPLC指紋圖譜研究采用氨基色譜柱、示差折光檢測器、乙腈-水(75∶25)為流動(dòng)相、柱溫37℃、檢測器40℃、進(jìn)樣量25μL、流速為1.0mL/min等色譜條件，建立了具有較強(qiáng)特征性和專屬性的洋槐蜂蜜糖類化合物HPLC指紋圖譜；確定了果糖、葡萄糖、蔗糖和麥芽糖等4個(gè)穩(wěn)定性較好的特征峰和1個(gè)具有重要參考價(jià)值的位于蔗糖和麥芽糖之間的色譜峰；對25個(gè)供試品分析得出：

3、果糖、葡萄糖、蔗糖和麥芽糖總含量均高于70％，其中果糖和葡萄糖總量在65％以上，蔗糖含量均在2％以下：對采自陜西、浙江、廣西、山東、甘肅和湖北6個(gè)省不同年份的供試樣品研究發(fā)現(xiàn)，就洋槐蜂蜜果糖和葡萄糖總量而言，2007年采集的樣品均比2006年的樣品含量高，其中湖北省年份間差異最大：不同省份間對比結(jié)果表明，陜西、甘肅和湖北樣品單糖含量較高，但差異不明顯，浙江和廣兩樣品含量較其他省份樣品低。摻假實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，加入飴糖，出現(xiàn)了一個(gè)新的未知峰，

4、保留時(shí)間為18.189，且麥芽糖含量大于6％；根據(jù)文獻(xiàn)資料，結(jié)合國標(biāo)GB18796-2005，我們建議：采用HPLC法檢測洋槐蜂蜜質(zhì)量時(shí)，若出現(xiàn)保留時(shí)間為18.189的色譜峰和麥芽糖含量高于6％，則可判定為不符合標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品。 洋槐蜂蜜黃酮類化合物提取實(shí)驗(yàn)，以黃酮的吸附量和解吸率為指標(biāo)，從DM130、NAK-9和XAD-23種大孔吸附樹脂中選取了吸附解吸特性較好的XAD-2；最佳提取工藝參數(shù)為：供試樣液pH值控制在3較好，上樣速率以

5、1mL/min為宜，以70％乙醇洗脫時(shí)，XAD-2大孔樹脂的吸附量為20.12mg/g濕樹脂。 洋槐蜂蜜黃酮類化合物指紋圖譜的研究，色譜條件確定為：色譜柱為Hypersil BDS C18(4.6×250mm，5μm)；流動(dòng)相A為水：甲酸(95：5)，流動(dòng)相B為甲醇；梯度洗脫程序?yàn)?～15min.甲醇體積分?jǐn)?shù)為30％，15～20min，由30％增至40％，20～30min，由40％增至45％，30～50min，由45％增至60％

6、，50～52min，由60％增至80％％，52～60min，恒定為80％；流速為1.0mL/min：檢測波長為340nm：進(jìn)樣量為25μL：由25種供試樣品色譜圖得出：我國的洋槐蜂蜜黃酮類化合物的種類和含量存在差異：HPLC指紋圖譜有7個(gè)特征峰和1個(gè)保留時(shí)間為47.09的具有重要參考價(jià)值的色譜峰；根據(jù)相對保留值確定供試樣品中含有蘆丁、槲皮素和山奈酚。對采自陜西、浙江、廣西、山東、甘肅和湖北6省的不同年份的樣品進(jìn)行對比得出：供試樣品黃酮類

7、化合物的種類和含量均有所不同，蘆丁、槲皮素和山奈酚的含量分別為7.29～42.31μg/100g、2.61～70.51μg/100g和2.97～110.63μg/100g：就同省的不同年份的供試樣品黃酮類化合物含量而言，除廣西樣品含有的蘆丁和甘肅省樣品含有的槲皮素外，2006年3種黃酮類化合物的含量均不同程度的高于2007年樣品含量：不同產(chǎn)地含量對比發(fā)現(xiàn)，采自山東的供試樣品蘆丁、槲皮素和山奈酚總量最高，其次為甘肅、陜西樣品，湖北樣品含量

8、最少。由于洋槐蜂蜜成分的差異主要受氣象條件和生態(tài)條件差異影響，其中氣候條件包括溫度和降水等。根據(jù)氣象資料顯示，2006年春季(3月～5月)全國氣溫偏高，降水較多，時(shí)空分布極不均勻，日照偏多。在一定程度上解釋了同省份2007年采集的樣品比2006年的樣品單糖含量高這一試驗(yàn)結(jié)果。據(jù)Bell報(bào)道，黃酮類化合物是植物在逆境中抵抗壓力所產(chǎn)生的一種防御物質(zhì)。2006和2007年(3月～5月)溫度和降水資料，同樣可以解釋供試樣品中2006年樣品較20