融合激酶KIF5B--RET通過(guò)多途徑激活STAT3信號(hào)通路促進(jìn)肺癌細(xì)胞增殖.pdf

1、目的:肺癌是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率與死亡率均居惡性腫瘤首位。非吸煙患者肺癌的發(fā)生往往借助癌基因、分子信號(hào)的過(guò)度活化，已證實(shí)多種驅(qū)動(dòng)基因如EGFR(10～50％)，KRAS(10～30％)，ALK(5％)等是非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展的重要誘導(dǎo)因素。KIF5B-RET融合基因是最近在非小細(xì)胞肺癌中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新的潛在的癌基因，但目前KIF5B-RET如何激活特定信號(hào)傳導(dǎo)通路實(shí)現(xiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化及致癌作用則還不清楚。STAT3已被證實(shí)與一系列細(xì)胞

2、生物過(guò)程如存亡、增殖、分化等有關(guān)，在多種腫瘤包括肺癌中存在持續(xù)活化的情況。本次研究旨在探索KIF5B-RET融合基因在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要作用，以及STAT3（信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3）在上述過(guò)程中起到的作用。
　　方法:用RT-PCR法篩選中國(guó)人群非小細(xì)胞肺癌的KIF5B-RET融合陽(yáng)性患者。通過(guò)基因重組的方法建立穩(wěn)定表達(dá)KIF5B-RET融合蛋白的肺癌細(xì)胞系，通過(guò)生長(zhǎng)曲線、平板克隆以及裸鼠成瘤等體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該融合

3、激酶的致癌活性。進(jìn)一步通過(guò)western blot、抑制劑實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀和激酶活化等實(shí)驗(yàn)探索KIF5B-RET融合激酶下游相關(guān)機(jī)制。
　　結(jié)果:1.篩選到1例KIF5B-RET融合基因陽(yáng)性患者，比例約1.0％。2.體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)顯示KIF5B-RET融合蛋白顯著增強(qiáng)陽(yáng)性肺癌細(xì)胞的增殖能力。3.Western blot實(shí)驗(yàn)表明STAT3信號(hào)通路在KIF5B-RET在調(diào)控細(xì)胞增殖的機(jī)制中起重要作用。抑制劑實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀和激酶活化實(shí)