有機(jī)物與生物分子相互作用的毛細(xì)管電泳法研究及應(yīng)用.pdf

1、目前，環(huán)境中污染物的毒性評(píng)價(jià)大多是通過(guò)生物實(shí)驗(yàn)方法實(shí)現(xiàn)的，這些方法存在耗時(shí)、費(fèi)用高、針對(duì)性差（因生物個(gè)體差異非常大且不同生長(zhǎng)期也存在很大的差異）等不足，更不是一種基于作用機(jī)理的直接測(cè)試研究。為此，希望建立一種直接對(duì)污染物毒性進(jìn)行評(píng)價(jià)的儀器分析方法，以便快速、準(zhǔn)確地獲得各種污染物的毒性數(shù)據(jù)。 本課題主要通過(guò)毛細(xì)管電泳相互作用分析方法研究污染物與受體的相互作用力的大小，實(shí)現(xiàn)對(duì)污染物生物活性及環(huán)境中污染物對(duì)生物體和人體的毒性作用的評(píng)

2、價(jià)。因?yàn)槲廴疚锒拘缘拇笮≈饕Q于它們與靶器官，也即受體作用的大小。對(duì)于某些受體，作用力大，相應(yīng)的毒性也越大。結(jié)合常數(shù)是表征分子間相互作用強(qiáng)弱的主要參數(shù)，所以測(cè)定污染物與受體相互作用的結(jié)合常數(shù)的大小能間接地反映污染物的毒性的大小。 本課題首先研究結(jié)構(gòu)上具有微小差別的鄰、間、對(duì)硝基苯胺共存時(shí)對(duì)一種受體牛血清白蛋白的相互作用。采用磷酸鹽為運(yùn)行緩沖溶液，它的酸度與生物大分子和配體相互作用所需要的生理環(huán)境的酸度大體相似。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，

3、三種同分異構(gòu)體與牛血清白蛋白相互作用的大小順序是：鄰硝基苯胺＞對(duì)硝基苯胺＞間硝基苯胺。相互作用后三種物質(zhì)在檢測(cè)波長(zhǎng)下的紫外吸收強(qiáng)度發(fā)生了很大的變化，根據(jù)作用前后紫外吸收強(qiáng)度的變化，同時(shí)推算出的相互作用的大小順序與毛細(xì)管電泳相互作用分析的結(jié)果是一致的。并初步比較了測(cè)得的結(jié)合常數(shù)值與這三種物質(zhì)的另外一些理化參數(shù)以及毒性數(shù)據(jù)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)它們之間有一定的相關(guān)性。 論文研究進(jìn)一步將八種苯胺類化合物混合在一起，測(cè)定它們共存時(shí)與牛血清白蛋

4、白的相互作用，模擬環(huán)境中的多組分共存復(fù)雜體系，使其更接近生物體真實(shí)的結(jié)合行為。求出它們結(jié)合常數(shù)的大小順序是：苯胺＜鄰甲苯胺＜對(duì)甲苯胺＜間硝基苯胺＜對(duì)硝基苯胺＜鄰硝基苯胺＜N, N-二甲基苯胺＜甲萘胺。對(duì)這些結(jié)合常數(shù)與八種物質(zhì)的生物實(shí)驗(yàn)毒性數(shù)據(jù)及其分子結(jié)構(gòu)參數(shù)等進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)它們之間存在較好的相關(guān)性。表明了用毛細(xì)管電泳相互作用分析方法評(píng)價(jià)環(huán)境中共存多種污染物的生物毒性具有一定可行性。 最后，針對(duì)常規(guī)前沿分析法存在的不足之處

5、，初步建立了毛細(xì)管電泳/改進(jìn)型前沿分析法，該方法保證了繪制工作曲線的配體的峰高與平衡體系中游離配體峰高的一致性，減小了實(shí)驗(yàn)誤差，提高了測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度。在比較研究毛細(xì)管電泳峰漂移法和毛細(xì)管電泳改進(jìn)型前沿分析法的基礎(chǔ)上，考察了兩種方法在計(jì)算間硝基苯胺與牛血清白蛋白相互作用結(jié)合常數(shù)方面的差異，并獲得兩者的結(jié)合常數(shù)，兩種方法求得的結(jié)合常數(shù)較為一致，從而驗(yàn)證了改進(jìn)后的毛細(xì)管電泳前沿分析法的可靠性。并應(yīng)用改進(jìn)型前沿分析法測(cè)定了聯(lián)苯胺與牛血紅蛋白的