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文檔簡介
1、納他霉素(Natamycin)又稱匹馬霉素,是一種廣泛應用的抗真菌抗生素,較低劑量可高效抑制酵母和霉菌,但對哺乳類動物細胞毒性極低,甚至無毒性。納他霉素是被美國食品藥品監(jiān)督管理局列為GRAS(Generally Regarded As Safe)行列和食品添加劑的少數(shù)幾種抗生素之一,已被美國等50多個國家認可使用,被應用于多種類食品的防腐,例如奶酪、發(fā)酵類肉制品、酸奶、飲料、酒和烘焙類食品,成為全球性范圍內(nèi)廣泛使用的食品添加劑,具有巨大
2、的商業(yè)價值。
納他霉素由鏈霉菌屬的納塔爾鏈霉菌(Streptomyces natalensis),恰塔努加鏈霉菌(Streptomyces chattanoogensis)和褐黃孢鏈霉菌(Streptomyces gilvosporeus)在好氧條件下發(fā)酵產(chǎn)生。目前工業(yè)化生產(chǎn)面臨的主要問題是納他霉素發(fā)酵產(chǎn)量低,生產(chǎn)成本相對較高。近幾年來,由于納他霉素生物合成基因簇的闡明,采用基因工程手段,如負調(diào)控基因的敲除以及特定路徑調(diào)節(jié)物質(zhì)
3、水平的改變,來提高納他霉素的發(fā)酵產(chǎn)率具有較大的可行性。
膽固醇氧化酶(pimE)基因被證實在納他霉素生物合成中起到信號蛋白的作用,本研究首先考察了異源膽固醇氧化酶對納他霉素生物合成的影響,結果表明,向S.gilvosporeus712的發(fā)酵培養(yǎng)液中添加異源的膽固醇氧化酶對納他霉素的生物合成具有促進作用。
為在發(fā)酵菌株中更好地發(fā)揮膽固醇氧化酶對納他霉素生產(chǎn)的促進作用,以褐黃孢鏈霉菌(S.gilvosporeus712)
4、為出發(fā)菌株,通過大腸桿菌-放線菌接合轉(zhuǎn)移的方法將pimE基因整合到出發(fā)菌株的基因組中,過量而穩(wěn)定的表達了pimE基因,得到工程菌株S.gilvosporeus swjs-801。搖瓶發(fā)酵實驗結果表明,工程菌株納他霉素產(chǎn)量為1.74 g/L,比出發(fā)菌株提高了72%。且插入的pimE基因不影響菌體的生長?;蚬こ叹?-L發(fā)酵罐中發(fā)酵終產(chǎn)量達到7.0 g/L,比對照菌提高了153%。
對工程菌株S.gilvosporeus swjs
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