狄斯瓦螨(varroadestructor)誘導(dǎo)中華蜜蜂(apiscerana)和意大利蜜蜂(a.mellifera)差異基因表達及相關(guān)基因的沉默

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文狄斯瓦螨（Varroa destructor）誘導(dǎo)中華蜜蜂（Apiscerana）和意大利蜜蜂（A.mellifera）差異基因表達及相關(guān)基因的沉默姓名：張祎申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治指導(dǎo)教師：韓日疇20100606中I I J 人學(xué)博上學(xué){ 證論文A n n o t a t i o n ) ，5 1 個基因有詳細的注釋，根據(jù)分子功能和生物過程分類，所注釋基因可歸為1 6 個分子功能類和1 4 個生物

2、過程類。另外，使用實時定量P C R( q u a n t i t a t i v er e a l ．t i m eP C R q R T - P C R ) 技術(shù)進一步驗證了8 個差異表達基因的表達模式，說明S S H 方法是篩選差異表達基因的有效方法，所得差異基因都是真實可靠的。比較兩對文庫的差異表達基因，發(fā)現(xiàn)中蜂和意蜂的差異基因大多數(shù)是不同的，除了N p y - r 在兩種蜜蜂被狄斯瓦螨侵染后都下調(diào)，h e x l l 0 在中

3、蜂中上調(diào)但在意蜂中為下調(diào)。這些差異基因大部分都是參與代謝過程和神經(jīng)信號傳導(dǎo)過程。研究結(jié)果提供了中蜂和意蜂蜜蜂應(yīng)答瓦螨侵染在分子水平上的信息，但是所得基因功能還需進一步研究。本論文還利用R N A i 技術(shù)試圖沉默三個與狄斯瓦螨誘導(dǎo)相關(guān)的中蜂基因( h e x l l 0 ，p a r a ，d e f e n s i n ) ，為證明其是否與蜜蜂的抗螨作用有關(guān)提供實驗方法。首先建立中蜂幼蟲的實驗室飼養(yǎng)體系，采用喂食的方法將上述三個基因不

4、同片段d s R N A 導(dǎo)入3 齡中蜂幼蟲；針對d e f e n s i n 基因設(shè)置了3 個d s R N A ．d e f e n s i n濃度( 1 “g ／頭／天、3 ¨g ／頭／天和5p g ／頭／天) ，持續(xù)喂食三天后，發(fā)現(xiàn)在中蜂的預(yù)蛹、白眼蛹和褐眼蛹中靶標(biāo)基因d e f e n s i n 的轉(zhuǎn)錄水平被特異性抑制，但各濃度之間沒有顯著性差異；取食含有不同濃度d s R N A ．d e f e n s i

5、n 后，中蜂幼蟲存活率分別為7 3 ％、8 3 ％和8 7 ％，與對照相比顯著升高；羽化率分別是2 7 ％、4 4 ％和2 7 ％，與對照相比，僅飼喂3 p ∥頭／滅的處理組顯著升高。結(jié)果表明，飼喂d s R N A ．d e f e n s i n 影響靶標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄、中蜂幼蟲的存活率及蛹的羽化率。然而，以h e x l l O 和p a r a 合成的不同d s R N A 片段分別持續(xù)飼喂中蜂3 齡幼蟲三天后( 1p g ／頭／天