中華蜜蜂轉(zhuǎn)錄組測序及雌性蜜蜂基因表達分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究以中華蜜蜂(Apis cerana cerana)為材料，通過轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)獲得了中華蜜蜂的轉(zhuǎn)錄組信息，并通過數(shù)字基因表達譜(Digital Ggene Expression Profile，DGE)測序分析比較了中華蜜蜂蜂王和工蜂的基因表達差異。另外克隆了中華蜜蜂DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶3(DNA methyltransferase3，Dnmt3)基因及分析了其mRNA的表達。
　　通過轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)，獲得了51，581，510

2、條clean reads對應(yīng)4.64 Gb核苷酸。這些reads組裝成46，999個Unigene，平均長度676 bp?；谖鍌€數(shù)據(jù)庫(nr、Swiss-Prot、GO、KEGG和COG)用Blastx進行相似性比對(E值<10-5)，共有24，630個unigenes被注釋。將獲得的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)作為參考數(shù)據(jù)庫，用DGE方法分析比較中華蜜蜂蜂王和工蜂的基因表達差異。分別從蜂王和工蜂中獲得5，962，735和5，663，952標簽。檢測到

3、414個基因有差異表達，蜂王與工蜂相比，其中189個是上調(diào)，225個是下調(diào)。我們選擇了10個差異表達的unigenes，用qRT-PCR驗證了在蜂王和工蜂中的表達，結(jié)果顯示這些基因的qRT-PCR結(jié)果與DGE數(shù)據(jù)相符合。
　　采用RT-PCR技術(shù)克隆了Dnmt3基因；采用熒光定量PCR檢測不同發(fā)育時期工蜂和蜂王頭部的Dnmt3基因mRNA的表達量。結(jié)果表明：該基因cDNA序列全長2277bp，編碼758個氨基酸殘基，預(yù)測的蛋白分子

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