中華蜜蜂轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及雌性蜜蜂基因表達(dá)分析.pdf

1、本研究以中華蜜蜂(Apis cerana cerana)為材料，通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)獲得了中華蜜蜂的轉(zhuǎn)錄組信息，并通過數(shù)字基因表達(dá)譜(Digital Ggene Expression Profile，DGE)測(cè)序分析比較了中華蜜蜂蜂王和工蜂的基因表達(dá)差異。另外克隆了中華蜜蜂DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶3(DNA methyltransferase3，Dnmt3)基因及分析了其mRNA的表達(dá)。
　　通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)，獲得了51，581，510

2、條clean reads對(duì)應(yīng)4.64 Gb核苷酸。這些reads組裝成46，999個(gè)Unigene，平均長(zhǎng)度676 bp?；谖鍌€(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)(nr、Swiss-Prot、GO、KEGG和COG)用Blastx進(jìn)行相似性比對(duì)(E值<10-5)，共有24，630個(gè)unigenes被注釋。將獲得的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)作為參考數(shù)據(jù)庫(kù)，用DGE方法分析比較中華蜜蜂蜂王和工蜂的基因表達(dá)差異。分別從蜂王和工蜂中獲得5，962，735和5，663，952標(biāo)簽。檢測(cè)到

3、414個(gè)基因有差異表達(dá)，蜂王與工蜂相比，其中189個(gè)是上調(diào)，225個(gè)是下調(diào)。我們選擇了10個(gè)差異表達(dá)的unigenes，用qRT-PCR驗(yàn)證了在蜂王和工蜂中的表達(dá)，結(jié)果顯示這些基因的qRT-PCR結(jié)果與DGE數(shù)據(jù)相符合。
　　采用RT-PCR技術(shù)克隆了Dnmt3基因；采用熒光定量PCR檢測(cè)不同發(fā)育時(shí)期工蜂和蜂王頭部的Dnmt3基因mRNA的表達(dá)量。結(jié)果表明：該基因cDNA序列全長(zhǎng)2277bp，編碼758個(gè)氨基酸殘基，預(yù)測(cè)的蛋白分子