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1、本研究以中華蜜蜂(Apis cerana cerana)為材料,通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)獲得了中華蜜蜂的轉(zhuǎn)錄組信息,并通過數(shù)字基因表達(dá)譜(Digital Ggene Expression Profile,DGE)測(cè)序分析比較了中華蜜蜂蜂王和工蜂的基因表達(dá)差異。另外克隆了中華蜜蜂DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶3(DNA methyltransferase3,Dnmt3)基因及分析了其mRNA的表達(dá)。
通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù),獲得了51,581,510
2、條clean reads對(duì)應(yīng)4.64 Gb核苷酸。這些reads組裝成46,999個(gè)Unigene,平均長(zhǎng)度676 bp?;谖鍌€(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)(nr、Swiss-Prot、GO、KEGG和COG)用Blastx進(jìn)行相似性比對(duì)(E值<10-5),共有24,630個(gè)unigenes被注釋。將獲得的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)作為參考數(shù)據(jù)庫(kù),用DGE方法分析比較中華蜜蜂蜂王和工蜂的基因表達(dá)差異。分別從蜂王和工蜂中獲得5,962,735和5,663,952標(biāo)簽。檢測(cè)到
3、414個(gè)基因有差異表達(dá),蜂王與工蜂相比,其中189個(gè)是上調(diào),225個(gè)是下調(diào)。我們選擇了10個(gè)差異表達(dá)的unigenes,用qRT-PCR驗(yàn)證了在蜂王和工蜂中的表達(dá),結(jié)果顯示這些基因的qRT-PCR結(jié)果與DGE數(shù)據(jù)相符合。
采用RT-PCR技術(shù)克隆了Dnmt3基因;采用熒光定量PCR檢測(cè)不同發(fā)育時(shí)期工蜂和蜂王頭部的Dnmt3基因mRNA的表達(dá)量。結(jié)果表明:該基因cDNA序列全長(zhǎng)2277bp,編碼758個(gè)氨基酸殘基,預(yù)測(cè)的蛋白分子
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