tim3對h.pylori作用的鼠源性巨噬細(xì)胞內(nèi)tlr4信號通路的影響

1、學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得直昌太堂或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名( 手寫) ： 簽字F j 期： 弼 年碾月D 6 同學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)

2、位論文作者完全了解直昌太堂有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國學(xué)術(shù)期刊( 光盤版) 電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》和《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾

3、提供信息服務(wù)。( 保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書) ／ 刀學(xué)讎文儲簽名( 瑚：徽 新簽名( 瑪：擲≯ 、l簽字日期：抓年。6 月o ；o n 簽字同期：溯3 年D 6 月D 6 日摘要B 組：細(xì)菌和細(xì)胞M O I 值為5 0C 組：細(xì)菌和細(xì)胞M O I 值為1 0 0D 組 ：細(xì)菌和細(xì)胞M O I 值為2 0 0細(xì)菌與細(xì)胞培養(yǎng)1 2 小時后收集細(xì)胞。( 3 ) T i m - 3 重組真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建、鑒定①分離小鼠脾臟單個核細(xì)胞

4、，設(shè)計針對T i m 一3 基因的特異性引物并擴增目的基因。②將T i m 一3 擴增產(chǎn)物插入到p L V X —I R E S —Z s G r e e n l 載體，構(gòu)建重組質(zhì)粒。擴增、提取重組質(zhì)粒，并采用酶切和測序鑒定。( 4 ) T i m - 3 重組真核表達(dá)質(zhì)粒的真核表達(dá)采用陽脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將p L V X —I R E S ～Z s G r e e n —T i m 一3 轉(zhuǎn)入小鼠巨噬細(xì)胞，觀察有無熒光及熒光強度，并收集細(xì)

5、胞檢測T i m - 3m R N A 及蛋白表達(dá)。( 5 ) 擐p y l o r i 作用對T i m - 3 過表達(dá)巨噬細(xì)胞T i m - 3 和T L R 4 信號通路及炎性細(xì)胞因子分泌的影響@ T i m - 3 基因轉(zhuǎn)染②實驗分組以H p S S l ( M O I = 1 0 0 ) 作用小鼠巨噬細(xì)胞，實驗分組如下：對照組1 ：細(xì)胞+ 轉(zhuǎn)染試劑對照組2 ：細(xì)胞+ 轉(zhuǎn)染試齊U + T i m - 3 質(zhì)粒對照組實驗組實驗組實

6、驗組細(xì)胞+ 轉(zhuǎn)染試劑+ 空質(zhì)粒細(xì)胞+ 轉(zhuǎn)染試劑+ 丘p y J o r i細(xì)胞+ 轉(zhuǎn)染試劑+ T i m 一3 質(zhì)粒+ 丘p y ] o r i細(xì)胞+ 轉(zhuǎn)染試劑+ 空質(zhì)粒+ 丘p y l o r i丘p y ] o r i 作用1 2 d , 時后收集細(xì)胞和培養(yǎng)上清。( 6 ) 檢測方法：①采用M T T 法檢N Y ．p y l o r i 對巨噬細(xì)胞增殖的影響②采用R T —P C R 的方法檢測各組細(xì)胞p 勺T i m - 3 、