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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
通過(guò)檢測(cè)鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)上清液處理過(guò)的巨噬細(xì)胞的TLR2、TLR4、Dectin-1 mRNA表達(dá)水平,明確角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)體系對(duì)巨噬細(xì)胞模式識(shí)別受體表達(dá)的影響。
方法:
取0~3天的C57BL/6J胎鼠,分離角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)至第2代,制備鼠角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)基b液(KC-72h液),鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)基c液(KC-CA-72h液)。白色念珠臨床菌株在98℃
2、溫度下加熱10分鐘滅活。取9-12周齡C57BL/6J小鼠股骨、脛骨骨髓細(xì)胞分化誘導(dǎo)為成熟M1型巨噬細(xì)胞用于本實(shí)驗(yàn)。將實(shí)驗(yàn)分為:空白對(duì)照組、20%b液組、20%c液組,根據(jù)分組不同,用不同上清液分別預(yù)處理巨噬細(xì)胞12小時(shí),收獲巨噬細(xì)胞,提取RNA,采用real-timePCR在mRNA水平檢測(cè)Dectin-1、TLR2、TLR4的表達(dá)水平。
結(jié)果:
經(jīng)鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)上清液處理后,巨噬細(xì)胞表達(dá)Dect
3、in1 mRNA的水平與空白對(duì)照組相比減少(P<0.05);鼠角質(zhì)形成細(xì)胞上清液能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞TLR4 mRNA表達(dá),與空白對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);經(jīng)鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)上清液處理后,巨噬細(xì)胞表達(dá)TLR2、TLR4 mRNA的水平與空白對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)上清液處理后與僅經(jīng)鼠角質(zhì)形成細(xì)胞上清液處理后的巨噬細(xì)胞表達(dá)的TLR2、TLR4、Dectin
4、1 mRNA水平,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);僅經(jīng)鼠角質(zhì)形成細(xì)胞上清液處理后巨噬細(xì)胞表達(dá)TLR2、Dectin1 mRNA的水平與空白對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
結(jié)論:
鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)能夠抑制巨噬細(xì)胞Dectin-1 mRNA的表達(dá);僅經(jīng)角質(zhì)形成細(xì)胞上清液處理過(guò)的巨噬細(xì)胞,TLR4mRNA表達(dá)上升;鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)對(duì)巨噬細(xì)胞TLR2、TLR4 mRNA的表達(dá)
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