1.ecadherin和βcatenin基因在腸上皮化生和腸型胃癌中表達(dá)及甲基化研究;2.正常胃粘膜細(xì)胞與腸上皮化生細(xì)胞差異表達(dá)基因片段的克隆及表達(dá)研究

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文1.E-cadherin和β-catenin基因在腸上皮化生和腸型胃癌中表達(dá)及甲基化研究;2.正常胃粘膜細(xì)胞與腸上皮化生細(xì)胞差異表達(dá)基因片段的克隆及表達(dá)研究姓名：馬鳴超申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：孫開(kāi)來(lái)2001.4.1粘膜中的幽門(mén)螺旋桿菌。5 ．c D N A 代表性差異分析( c D N A ．R D A ) ：L C M 點(diǎn)擊2 5 0 0 次大約分別捕獲5 0 0 0 個(gè)正常胃粘膜細(xì)胞和腸上皮化

2、生細(xì)胞。用改進(jìn)的c 亡心叮A —R D A 方法比較了腸化生細(xì)胞和正常胃粘膜細(xì)胞的基因表達(dá)差異( 分別用來(lái)自于腸化生細(xì)胞和正常胃粘膜細(xì)胞的c D N A 擴(kuò)增片段作為D r i v e r 和r r e s t e r ) 。具體改進(jìn)步驟如下：( 1 ) 抽提c D N A 片段時(shí)用2 0 ul T E 在飽和酚氯仿中抽提兩次， 合并上層水溶液以提高產(chǎn)率：( 2 ) 在用乙醇沉淀之前向溶液中加入5 0 p gG l y c o g e

3、n 作為載體以提高產(chǎn)率；( 3 ) 用一2 0 ℃乙醇沉淀，2 0 ul H 0 溶解c D N A ：( 4 ) 本實(shí)驗(yàn)在雜交時(shí)同時(shí)大幅度減少D r ～e r 和T e s t e rD N A ， 以適應(yīng)微量標(biāo)本。每輪雜交均使用1 ugD r i v e rD N A ，而經(jīng)典c D N A ．I u ) A 每次雜交需要4 0 且g 鰣v e r 。6 ．R T - P C R 方法：( 1 ) 引物設(shè)計(jì)：根據(jù)各個(gè)差異片段序列及它

4、們所屬基因已知的c D N A 序列，利用P r i m e r P i c k i I l 烈P r i m e r 3 ) 軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。( 2 ) R T —P C R ( 兩步法) ：用S u p e r S c 呻t ⅡR n a s e H —R e v e r s eT m s c 邱t a S e 試劑盒。每一c D N A 樣品同時(shí)用相應(yīng)目的基因引物和g a p d l l 引物( 內(nèi)對(duì)照) 同樣條件下分別進(jìn)行各自

5、反應(yīng)和電泳。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1 ．病理學(xué)分析結(jié)果：在1 2 個(gè)胃癌標(biāo)本中，有1 0 例腸型腺癌，其中有8 例出現(xiàn)慢性萎縮性胃炎和腸化生，說(shuō)明腸型胃癌中腸上皮化生比率之高。2 ．免疫組化方法分析腫瘤相關(guān)基因表達(dá)的結(jié)果：E - c a d h e r i n 在正常胃粘膜細(xì)胞中高表達(dá)，在胃癌細(xì)胞中表達(dá)減弱或消失，而且這種變化在腸上皮化生細(xì)胞中就已經(jīng)開(kāi)始。 縣?！辴 e n i n 在正常腺體細(xì)胞、腸上皮化生細(xì)胞以及腸型胃癌表達(dá)基本相同。3 個(gè)彌漫型