風(fēng)濕性疾病的自身抗體

1、風(fēng)濕性疾病的自身抗體北京協(xié)和醫(yī)院唐福林自身抗體是指自身細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞表面和細(xì)胞外抗原的免疫球蛋白，見(jiàn)于多種風(fēng)濕性疾病，尤其在彌漫性結(jié)締組織病中更為常見(jiàn)。目前用于臨床的常見(jiàn)自身抗體有抗核抗體、抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體、抗磷脂抗體、類風(fēng)濕因子、抗線粒體抗體等。自身抗體有多種檢測(cè)方法，包括間接免疫熒光法（IF）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、放射免疫法（RIA）、被動(dòng)血凝法（PHA）、顆粒凝集法（PA）、對(duì)流免疫電泳法（CIE）、免疫雙擴(kuò)散法（ID

2、）等，針對(duì)可溶性成分（如ENA、DNA、凝血因子、補(bǔ)體）可采用ID、CIE、ELISA、RIA法測(cè)定；針對(duì)不溶性成分可采用間接免疫熒光法。不同檢測(cè)技術(shù)的敏感性和特異性存在差別。目前各單位已采用的多種自身抗體檢測(cè)方法尚未標(biāo)準(zhǔn)化，因此某一實(shí)驗(yàn)室結(jié)果難與另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室所測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較從而造成了誤判、誤導(dǎo)。判斷某一診斷試驗(yàn)應(yīng)從四個(gè)特性（敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值）來(lái)評(píng)價(jià)其效用。對(duì)于自身抗體的檢測(cè)常常因?yàn)槠浯嬖诰?xì)復(fù)雜的免疫化學(xué)反應(yīng)而出

3、現(xiàn)交叉反應(yīng)。必須指出，少部分正常人有低滴度的自身抗體，故不能僅憑某一種自身抗體的存在而診斷為某一特定的疾病。如同分析任何檢測(cè)結(jié)果一樣，自身抗體的陽(yáng)性或陰性不是診斷的唯一條件，必須分析檢測(cè)方法的可靠性，必要時(shí)多次重復(fù)檢測(cè)或多家實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，只有密切結(jié)合臨床對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析才能得出正確的診斷?？购丝贵w（AutoantibodytoNuclearAntigenANA）一定義：傳統(tǒng)認(rèn)為抗細(xì)胞核內(nèi)成分的抗體稱為ANA，這一概念強(qiáng)調(diào)了細(xì)胞核的重要性

4、，因?yàn)榧?xì)胞核內(nèi)有DNA、RNA、堿性組蛋白、非組蛋白、磷脂及各種蛋白酶等復(fù)雜的化學(xué)組成，決定了ANA存在不同的成分，因此，構(gòu)成了抗核抗體譜（ANAs）。隨著免疫熒光技術(shù)的改進(jìn)，先進(jìn)的免疫學(xué)技術(shù)的應(yīng)用和分子生物學(xué)的發(fā)展，目前對(duì)ANA的理解已不再局限于核成分，而是指抗核酸（nucleicacid）和核蛋白（nucleoprotein）抗體的總稱。故現(xiàn)在對(duì)ANA靶抗原的理解已從傳統(tǒng)的細(xì)胞核擴(kuò)大到整個(gè)細(xì)胞。ANA在許多風(fēng)濕性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼

5、瘡、硬皮病、干燥綜合征、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等均可陽(yáng)性，因此是診斷彌漫性結(jié)締組織病的篩選抗體。健康老年人、感染性疾病和服用某些藥物（普魯卡因酰胺、肼苯噠嗪、苯妥英鈉、異煙肼等）的患者均可有ANA陽(yáng)性。1954年Hargrave發(fā)現(xiàn)LE細(xì)胞奠定了當(dāng)今ANAs的基礎(chǔ)。已知LE因子即是ANA，它是一種抗DNA組蛋白（DNP）復(fù)合物的抗體，目前已采用簡(jiǎn)易和迅速的抗DNP抗體測(cè)定取代LE細(xì)胞的檢查。二測(cè)定原理和方法：常規(guī)檢測(cè)ANA的方法是以鼠肝和鼠腎為底

6、物的間接免疫熒光法。由于某些抗原如SSARO、Jo1、rRNP等在細(xì)胞漿內(nèi)比核內(nèi)含量多，因此，鼠肝或鼠腎作底物檢測(cè)常呈陰性反應(yīng)，為彌補(bǔ)這一不足，國(guó)外以核質(zhì)豐富的Hep2細(xì)胞（人喉癌上皮細(xì)胞）為底物提高了ANA檢測(cè)的陽(yáng)性率。對(duì)于ANA陽(yáng)性的標(biāo)本，應(yīng)排除實(shí)驗(yàn)過(guò)程中血清洗脫不盡或標(biāo)有熒光素的抗人免疫球蛋白濃度過(guò)高而造成的假陽(yáng)性。必須強(qiáng)調(diào)指出，待測(cè)血清標(biāo)本一定要稀釋，因?yàn)榈偷味鹊腁NA可在感染性疾病、腫瘤及正常人中出現(xiàn)。未加稀釋的正常人血清可有

7、13的呈陽(yáng)性ANA反應(yīng)。ANA作為自身免疫性結(jié)締組織病的篩選試驗(yàn)必須強(qiáng)調(diào)高滴度。對(duì)于ANA陰性的標(biāo)本，要考慮是否有底物保存不當(dāng)或操作過(guò)程中造成的誤差，抑或藥物治療后病情緩解所致。ANAS的熒光染色型別有五種。（1）均質(zhì)型：核質(zhì)染色均勻一致，此型與抗組蛋白抗體和抗DNA抗體有關(guān)；（2）斑點(diǎn)型：核質(zhì)染色呈斑點(diǎn)狀，核膜存在，此型多與可溶性核抗原（ENA）抗體有關(guān)；（3）核仁型：僅核仁著染熒光，與4—6SRNA抗體相關(guān)，在硬皮病中較多見(jiàn)；（4）

8、核周（核膜）型：熒光包繞在核膜周圍，多與抗雙鏈DNA抗體有關(guān)；（5）著絲點(diǎn)型：處于分裂時(shí)相的Hep2細(xì)胞為底物可出現(xiàn)依著絲點(diǎn)散在排列的特殊點(diǎn)狀圓形，與斑點(diǎn)型區(qū)別的重要之處在于前者核膜已消失，主要與雷諾現(xiàn)象有相關(guān)性。熒光染色核型可隨血清稀釋的改變白多肽較高特異性的為B和D帶。國(guó)際上通常用對(duì)流電泳和免疫雙擴(kuò)散法檢測(cè)抗Sm抗體，其陽(yáng)性率在SLE中為30%左右，抗Sm抗體對(duì)早期、不典型的SLE或經(jīng)治療緩解后SLE回顧性診斷有很大幫助。必須強(qiáng)調(diào)指

9、出，Sm和nRNP是同一分子復(fù)合物（RNA蛋白顆粒）中的不同抗原位點(diǎn)，其中的RNA富含尿嘧啶核苷（u1、u2、u4u6），如前述，Sm含有u1、u2和u4u6，而nRNP(u1RNP)僅含u1RNA。從理論上講，測(cè)得抗Sm抗體的同時(shí)，也應(yīng)測(cè)得抗u1RNP；而測(cè)得抗u1RNP則抗Sm抗體亦可為陰性。我院開(kāi)展臨床檢測(cè)15年來(lái)，用電泳和雙擴(kuò)散法，尚未有抗Sm抗體陽(yáng)性而抗u1RNP抗體陰性，也即抗Sm抗體陽(yáng)性均伴有抗u1RNP抗體，而抗u1RN

10、P抗體可以單獨(dú)存在?？箄2RNP抗體在系統(tǒng)性硬化癥伴多發(fā)性肌炎的重疊綜合征中陽(yáng)性頻率較高。銀屑病及雷諾現(xiàn)象的病人也可呈陽(yáng)性?？箄3RNP抗體常與系統(tǒng)性硬化相關(guān)，且常伴有原發(fā)性肺動(dòng)脈高壓、骨骼肌和小腸受累。（3）抗SSARO抗體：由于該抗體與干燥綜合征（Sjogrensyndromess）相關(guān)，故取名為SSA，也有人取名于最早檢測(cè)到的病人名字Ro。SSA與Ro的抗原性、生化特點(diǎn)一致。SSARo是含有YYRNA的蛋白質(zhì)，更多存在于胞漿內(nèi)。在

11、以鼠肝為底物的ANA檢測(cè)中，抗SSA抗體常呈陰性反應(yīng)，而以Hep2細(xì)胞為底物，則ANA為陽(yáng)性。（4）抗SSBLa、Ha抗體：另外還有一種與干燥綜合征相關(guān)的抗體稱SSB，也有人將SSB抗體以病人名字La或Ha命名。SSBLa、Ha是RNA多聚酶轉(zhuǎn)錄中的小RNA磷酸蛋白質(zhì)。臨床上常規(guī)采用對(duì)流電泳和免疫雙擴(kuò)散法檢測(cè)抗SSA和抗SSB抗體。近年來(lái)發(fā)展的免疫印跡檢測(cè)中的抗SSA與分子量為60KD和52KD的兩條蛋白多肽發(fā)生反應(yīng)。有人認(rèn)為60KD的

12、多肽在SLE中較SS更為多見(jiàn)?？筍SB與分子量為48KD、47KD、45KD的三條蛋白多肽反應(yīng)，但48KD更具有特異性。如上所述抗SSARo和抗SSBLa、Ha與SS有關(guān)。在原發(fā)性SS病人中，抗SSARo和抗SSBLa、Ha陽(yáng)性率分別為60%和40%，但在其他結(jié)締組織病人中，這兩種抗體亦可存在。以Wil2細(xì)胞提取抗原，在原發(fā)SS、SLE、RA、SD、PMDM和非結(jié)締組織病中，抗SSARo陽(yáng)性率分別為75%、39%、20%、19%、25%

13、和0%；而抗SSBLa、Ha陽(yáng)性率分別為59%、10%、5%、2%、5%和0%?？筍SB抗體較抗SSA抗體診斷干燥綜合征更為特異。在臨床上所謂ANA陰性的SLE病人，大部分有抗SSA抗體。進(jìn)一步的研究還表明，抗SSA和抗SSB抗體陽(yáng)性可造成新生兒狼瘡及嬰兒心臟傳導(dǎo)阻滯等先天性心臟病?？筍SA和抗SSB抗體常與血管炎、淋巴結(jié)腫大、白細(xì)胞減少、光過(guò)敏、皮損、紫癜等臨床癥狀相關(guān)。（5）抗rRNP抗體：rRNP（ribosomeRNP）與nRN

14、P抗原性不同，它是主要在胞漿中的一種磷酸蛋白。免疫印跡法測(cè)得抗rRNP抗體主要有38KD、16KD、15KD三條蛋白多肽。國(guó)外報(bào)道近一半的SLE病人有抗rRNP抗體。我們檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，抗rRNP抗體在SLE、RA、PMDM、SS、MCTD和SD中的陽(yáng)性率分別為24%、1.7%、9%、4%、0%、和0%。我們以免疫雙擴(kuò)散法測(cè)得的24例抗rRNP陽(yáng)性的SLE病人中37.5%（924）伴有中樞神經(jīng)癥狀，而在抗rRNP陰性SLE病人中，僅12.5%

15、（216）伴又中樞神經(jīng)癥狀，兩者相比有顯著性差異。我們還發(fā)現(xiàn)，抗rRNP抗體不會(huì)隨病情的緩解立即消失，可持續(xù)12年后才轉(zhuǎn)陰。對(duì)于僅有rRNP抗體陽(yáng)性，ANA陰性的病人，應(yīng)密切隨訪，若干年后可能發(fā)展為典型的SLE。（6）抗PCNA（ProliferatingCellNuclearAntigen）抗體：抗增殖細(xì)胞的核抗原抗體。PCNA是分子量為35KD的DNA聚合酶δ副蛋白。用免疫雙擴(kuò)散法測(cè)得在SLE病人中陽(yáng)性率為35%，其他結(jié)締組織病人中