實(shí)驗(yàn)方法總結(jié)

1、1.1.葉片葉綠素含量的測(cè)定葉片葉綠素含量的測(cè)定葉片的葉綠素含量參照Arnon（1949）的方法進(jìn)行測(cè)定。稱(chēng)取去脈的水稻葉片0.1g，置于研缽中，加入預(yù)冷的80%丙酮、少許石英砂和CaCO3，研磨成漿，6000rpm冷凍離心10min，取上清。沉淀再用80%丙酮洗1次，再次6000rpm冷凍離心10min，將兩次離心得到的上清液合并。在上清液中加入80%丙酮定容至10ml，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)GENESYS10UV（Thermo）測(cè)定其

2、在645nm和663nm處的光吸收值，根據(jù)下列公式計(jì)算葉片的葉綠素含量。葉綠素a含量（mgL）=12.7A6632.69A645葉綠素b含量（mgL）=22.9A6454.68A663總?cè)~綠素含量（mgL）=8.02A66320.21A6452.2.土壤和葉片相對(duì)含水量的測(cè)定土壤和葉片相對(duì)含水量的測(cè)定土壤含水量采用稱(chēng)重法測(cè)定，每組測(cè)定20盆。葉片組織的水分狀況用葉片相對(duì)含水量(RWC)表示:RWC=(FWDW)(SWDW)其中FW、DW

3、和SW分別表示葉片鮮重、干重和飽和質(zhì)量方法：每次取葉片5片，從葉基部剪下，稱(chēng)量鮮重，后迅速將葉片放入清水中浸泡3小時(shí)后取出（即葉片重量不再發(fā)生變化，完全飽和），擦掉表面水分，稱(chēng)取飽和質(zhì)量，經(jīng)105℃30分鐘殺青后，在75℃下烘到恒重，記錄干重，并計(jì)算相對(duì)含水量。3.3.酶活性測(cè)定：酶活性測(cè)定：提取酶液，參照錢(qián)瓊秋等（Qianetal2006）的方法以緩沖液（0.05molLPBS，pH7.8）懸浮葉綠體，用于測(cè)定超氧化物歧化酶（SOD）

4、、和過(guò)氧化物酶（POD）、丙二醛（MDA）含量、蛋白質(zhì)含量的測(cè)定、抗壞血酸（AsA）。分別取0.5g材料于預(yù)冷的研缽中，加入8ml預(yù)冷的50mmol1的磷酸緩沖液（PBS，ph7.8）(先加2ml，在冰浴下研磨成勻漿后，將勻漿倒入10ml的離心管，再用6ml沖洗)10000r分離心20分鐘，取上清液。(lactoflavin)葉綠體懸浮液(chloplastsuspension)0.052支對(duì)照管以PBS代替懸浮液(PBSinstead

5、ofchloplastsuspensionin2controltubes)蒸餾水(Distilledwater)0.25總體積(Totalvolume)3.03.1.33.1.3活性的計(jì)算活性的計(jì)算SOD總活性[ug(FW)]=式中：SOD總活性以酶單位每克鮮重表示。比活力單位以酶單位每毫克蛋白表示。ACK——照光對(duì)照管的吸光度。AE——樣品管的吸光度。VT——樣品液總體積，mL。V1——測(cè)定時(shí)樣品用量，mL。W——樣品鮮重，g。蛋白質(zhì)

6、含量單位為mgg。3.23.2PODPOD酶活性的測(cè)定酶活性的測(cè)定參照Chance&Maehly(1955)的方法，愈創(chuàng)木酚法測(cè)定過(guò)氧化物酶（POD）活性3.2.13.2.1溶液的配制溶液的配制（1）0.05molLPH5.5的磷酸緩沖液：（2）2%雙氧水溶液：（3）0.05molL愈創(chuàng)木酚溶液：應(yīng)該用愈創(chuàng)木酚的分子量乘以摩爾數(shù)得到所需愈創(chuàng)木酚的質(zhì)量，然后溶于95%酒精中。如配制1L0.05molL的愈創(chuàng)木酚應(yīng)稱(chēng)取愈創(chuàng)木酚：124.13