新型喜樹堿衍生物抗腫瘤生物活性分析.pdf

1、本論文旨在研究新型喜樹堿衍生物抑制腫瘤生長的生物活性以及可能存在的作用機制。
　　通過分子對接技術和MTT方法評估三種由大連理工大學精細化工國家重點實驗室合成的新型喜樹堿衍生物脯氨醇-10-羥基喜樹堿(PR-HCPT)，哌啶醇-10-羥基喜樹堿(PI-HCPT)，羥乙基哌嗪-10-羥基喜樹堿(HP-HCPT)，并對PR-HCPT促人乳腺癌細胞（MCF-7細胞）的凋亡作用及其對細胞凋亡通路蛋白表達量的影響進行研究，探究其促人乳腺癌細

2、胞凋亡的作用機制。
　　本研究采用不同組織來源的五種腫瘤細胞:人乳腺癌細胞株(MCF-7)、人胃癌細胞株(BGC-823)、人肝癌細胞株(SMMC-7721)、人小細胞肺癌細胞株(NCI-H1668和NCI-H446)，以五種腫瘤細胞作為體外細胞模型，采用MTT法檢測三種喜樹堿衍生物在1μM到50μM濃度范圍條件下對腫瘤細胞增殖作用的影響。MTT結果表明三種喜樹堿衍生物均可抑制不同腫瘤細胞系增殖，且促細胞凋亡作用呈濃度時間雙依賴特

3、點。但對于不同組織來源的細胞抑制強度不同，其中PR-HCPT對MCF-7細胞最為敏感，48h的半數抑制率為11.59μM。利用分子對接技術探究小分子衍生物和拓撲異構酶之間的作用關系，分子對接結果表明三種喜樹堿衍生物與拓撲異構酶在相同區(qū)域結合，且結合作用可能與兩者所形成的氫鍵有關。
　　通過Hochest33258染色觀察和流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，PR-HCPT可以誘導MCF-7細胞凋亡性死亡。HCPT作用于細胞后，可以看到細胞核固縮，

4、染色質凝集和凋亡小體形成等細胞凋亡形態(tài)學特點。用10μM和25μM的PR-HCPT處理MCF-7細胞后，細胞早期凋亡率由0.4％分別上升至72.2％和76.2％。運用瞬時轉染技術構建蛋白超表達細胞體系，蛋白質印跡法測量喜樹堿衍生物作用前后關鍵蛋白的表達情況，WesternBlot結果顯示，PR-HCPT處理后的MCF-7細胞，NF-κB基因表達量顯著下調，IκB蛋白表達量上升，但PTEN蛋白和AKT蛋白兩者表達量并無明顯改變。三種喜樹堿