生物技術(shù)題庫

1、一、名詞解釋1.生物技術(shù)：生物技術(shù)：也稱生物工程（bioengingineering），是指人們以現(xiàn)代生命科學為基礎(chǔ)，結(jié)合先進的工程技術(shù)手段和其他基礎(chǔ)學科的科學原理，按照預先的設(shè)計改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達到某種目的。2.植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)：是指在無菌條件下，把離體的植物器官、組織、細胞、原生質(zhì)體等材料接種在人工培養(yǎng)基中，使其發(fā)育成完整植株的過程。3、植物細胞全能性植物細胞全能性：任何一個擁有完整細胞核的植

2、物細胞都具有形成一個完整植株所必需的全部遺傳信息，在特定條件下表達可產(chǎn)生獨立的個體。4..脫分化脫分化：也叫去分化，已經(jīng)停止分化的細胞、組織、器官在離體培養(yǎng)條件下，逐漸失去其原來的結(jié)構(gòu)和功能而恢復其分生狀態(tài)，形成無組織結(jié)構(gòu)的細胞團的過程。5.再分化再分化：由脫分化產(chǎn)生的無組織結(jié)構(gòu)的細胞團在離體培養(yǎng)條件的剌激下重新分化成具有不同結(jié)構(gòu)和功能的細胞、組織、器官的過程，即再分化。6.培養(yǎng)基培養(yǎng)基：是植物組織培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。其成分是植物生長發(fā)育所

3、必需的各種物質(zhì)的來源，主要包括營養(yǎng)元素、植物生長調(diào)節(jié)劑、碳源、維生素、有機添加物等。7.外植體外植體：在植物組織培養(yǎng)中，用來進行培養(yǎng)的植物材料常稱外植體(explant)，包括植物器官、組織、細胞等。7.重組重組DNA技術(shù)技術(shù)：是指將一種生物體（供體）的基因與載體在體外進行拼接重組，然后轉(zhuǎn)入另一種生物體（受體）內(nèi)，使之按照人們的意愿穩(wěn)定遺傳并表達出新產(chǎn)物或新性狀的DNA體外操作程序，也稱為分子克隆技術(shù)。8.基因工程基因工程：就是將目的基

4、因插入到載體（質(zhì)粒，病毒）中，再把攜帶目的基因的載體轉(zhuǎn)入受體材料細胞中，使目的基因在受體細胞中表達。進而使受體生物表現(xiàn)出目的基因的性狀。⑴限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶：是一類能夠識別雙鏈DNA中的特定核苷酸序列，并在特定位點切割雙鏈DNA的內(nèi)切酶。⑵平齊末端平齊末端：當限制酶在它識別序列的中心軸線處將DNA的兩條鏈切開時，產(chǎn)生的則是平末端。⑶粘性末端粘性末端：當限制酶在它識別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA的兩條鏈分別切開時，產(chǎn)生的就是黏

5、性末端。⑷同裂酶同裂酶：能識別同一序列（切割位點可同或不同）但來源不同的兩種酶。⑸同尾酶同尾酶：有些限制性內(nèi)切酶雖然識別序列不完全相同，但切割DNA后，產(chǎn)生相同的黏端，這樣的酶彼此互稱為同尾酶。9.限制性內(nèi)切酶的活性限制性內(nèi)切酶的活性：在適當反應條件下，1小時內(nèi)完全酶解1g特定DNA底物，所需要的限制性內(nèi)切酶的量，為一個活性單位。10.限制性物理圖譜限制性物理圖譜：DNA上某些限制性內(nèi)切酶酶切位點的圖譜，可作為DNA片段的特殊標記。也稱

6、DNA物理圖譜。11.限制性內(nèi)切核酸酶的切割頻率限制性內(nèi)切核酸酶的切割頻率：切割頻率是指限制性內(nèi)切核酸酶在DNA分子中的預測切點數(shù)。12.回文序列回文序列：雙鏈DNA中的一段倒置重復序列，當該序列的雙鏈被打開后，可形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。這段序列被稱為回文序列。13.克隆載體克隆載體:將外源基因攜帶入宿主細胞，并在宿主細胞中進行DNA擴增和使外源基因得以高效表達。14.表達載體表達載體:在克隆載體基本骨架的基礎(chǔ)上增加表達元件（如啟動子、RBS、終

7、止子等），使目的基因能夠表達的載體。15.目的基因目的基因:把需要研究的基因稱為目的基因（靶基因或者插入基因）。要分離、改造、擴為擴增反應的模板，用含有選擇性堿基的引物對模板DNA進行擴增，選擇性堿基的種類數(shù)目和順序決定了擴增片段的特殊性，所以只有那些限制性位點側(cè)翼的核苷酸與引物的選擇性堿基相匹配的限制性片段才可被擴增。擴增產(chǎn)物經(jīng)放射性同位素標記聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，根據(jù)凝膠上DNA指紋的有無來檢出多態(tài)性。2.Nthern雜交原理雜交

8、原理：外源基因如果正常表達，在轉(zhuǎn)化植株的細胞有其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物特異mRNA生成，提取總RNA或mRNA并進行凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜并與標記好的探針雜交形成DNARNA雜合體，通過探針上的標記可檢測出目的mRNA。Nthern雜交程序：探針制備探針選擇：檢測外源基因轉(zhuǎn)錄的mRNA應使用同源的DNA探針，雜交后形成DNARNA雜合體；也可使用cDNA探針。探針序列的獲得人工合成PCR方法質(zhì)粒酶切法探針標記切口平移法②轉(zhuǎn)化植株總RNA的提取。RNA純度的分

9、析：A260A280=1.7—2.02.0若《2表明有異硫氰酸污染，有異丙醇重新沉淀，RNA濃度計算:RNA(ugml)=A260稀釋倍數(shù)40ugml分離柱層析法④電泳甲醛變性電泳單鏈使RNA，其鏈內(nèi)堿基易于氫鍵形成二級或三級結(jié)構(gòu)，而甲醛與堿基結(jié)合后形成保持線性，電泳時才與分子量標記成正比。⑤轉(zhuǎn)膜烘膜雜交信號檢測分析結(jié)。3.wetern雜交原理雜交原理：若目的基因表達正常，則在轉(zhuǎn)基因植物中含有一定量的目的蛋白。從轉(zhuǎn)基因植物中提取總蛋白質(zhì)

10、，兩蛋白質(zhì)樣品溶于去污劑和還原劑的溶液中，經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳使蛋白質(zhì)按分子發(fā)小分離，將分離的各蛋白條帶原位轉(zhuǎn)印到固相膜上。膜在高濃度的蛋白質(zhì)中溫育，以封閉非特異位點，加入特異抗體，印記上的目的的蛋白與一抗結(jié)合后，再加入能與一抗專一結(jié)合的標記好的二抗，最后痛過二抗上的標記化合物的性質(zhì)進行檢出。4.可被利用的遺傳標記應具備以下幾個條件可被利用的遺傳標記應具備以下幾個條件：多態(tài)性高；表現(xiàn)為共顯性；對農(nóng)藝性狀影響??；經(jīng)濟方便，容易觀察記

11、載。5.基因組文庫基因組文庫：是將目標生物的全部基因組DNA切割成一定長度的DNA片段并克隆到某種載體上而形成的集合。根據(jù)所用載體不同，基因組文庫分為以下幾種。質(zhì)粒文庫，噬菌體文庫，黏粒文庫，人工染色體文庫。6.基因組文庫的構(gòu)建步驟基因組文庫的構(gòu)建步驟：1目標植物基因組DNA提取及片段化2載體的選擇與制備3DNA片段與載體連接，噬菌體進行離體包裝4重組體感染宿主細胞（大腸桿菌）5轉(zhuǎn)化細胞的篩選放射性標記探針進行文庫雜交篩選7.mRNA差

12、異顯示技術(shù)分離差異表達的基因差異顯示技術(shù)分離差異表達的基因：其基本原型：利用真核生物成熟mRNA的3“polyA結(jié)構(gòu)，用oligo(dT)12MN（其中M為錨定堿基，起增大引物Tm值得作用，M為ACGT中的任意一種）作為描定引物與mRNA的PLOYA結(jié)合，再反轉(zhuǎn)錄酶的作用下將MRNA反轉(zhuǎn)錄成mRNAcDNA的雜交分子，這一過程即差異顯示反轉(zhuǎn)錄，然后在用10BP的隨機引物與OLIHO(DT)12MN組成的引物對，以MRNACDNA為模板進

13、行PCR擴增，PCR產(chǎn)物進行聚丙烯酰氨凝膠電泳，通過放射自顯影或顯色反應即可獲得差異表達基因的擴增條帶。聚合酶鏈式反應聚合酶鏈式反應：在有DNA單鏈，引物，DNTPS、DNA聚合酶等條件下，DNA聚合酶即可從引物開始沿單鏈DNA的5”3“合成其互補鏈，而PCR儀可以使這一反應不斷進行下去，直到條件不復存在。8.PCR反應原理反應原理：RTPCR即反轉(zhuǎn)錄PCR，以MRNA為模板，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，合成CDNA第一鏈的過程。在已知目的基因