燈盞花素對缺血再灌注大鼠心肌超微結(jié)構(gòu)及細胞凋亡的影響

1、燈盞花素對缺血再灌注大鼠心肌超微結(jié)構(gòu)及細胞凋亡的影響燈盞花素對缺血再灌注大鼠心肌超微結(jié)構(gòu)及細胞凋亡的影響龔明玉1，張力2，杜超1，周曉慧1（1承德醫(yī)學(xué)院，河北承德067000；2承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院放療科，河北承德067000）［摘要］［摘要］目的：目的：研究燈盞花素(breviscapine)對在體大鼠缺血再灌注損傷的保護作用及其機制。方法：方法：40只SD大鼠隨機分為假手術(shù)組，缺血再灌注組（IR組），燈盞花素組。燈盞花素組大鼠于術(shù)前1

2、周分別腹腔注射不同劑量的燈盞花素（25，50mg.kg1.d1），另2組給等量生理鹽水。以左冠狀動脈前降支穿線結(jié)扎法制備心肌缺血模型，松開結(jié)扎線造成再灌注。采用AnnexinvPI雙染，流式細胞儀檢測心肌細胞的凋亡情況；電鏡觀察各組大鼠心肌超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果：結(jié)果：燈盞花素可明顯降低缺血再灌注大鼠心肌細胞的凋亡率（P＜0.05，P＜0.01），且較IR組心肌細胞超微結(jié)構(gòu)損傷程度減輕。結(jié)論：結(jié)論：燈盞花素對缺血再灌注心肌細胞具有保護作用

3、，其機制可能是通過抑制心肌細胞凋亡來實現(xiàn)的?！娟P(guān)鍵詞】【關(guān)鍵詞】燈盞花素；細胞凋亡；心?。蝗毖俟嘧?；超微結(jié)構(gòu)EffectEffectofofBreviscapineBreviscapineAgainstAgainstMyocardialMyocardialIschemiaIschemiaReperfusionReperfusionononMyocardialMyocardialCellCellUltrastructureUltrast

4、ructureApoptosisApoptosisininRatsRatsGONGGONGMingyuMingyu，ZHANGZHANGLiLi，DUDUChaoChao，etetalal（1ChengdeChengdeMedicalMedicalCollegeCollege，HebeiHebeiChengdeChengde067000China067000China2DepartmentDepartmentofofRsdiationR

5、sdiationOncologyAffiliatedOncologyAffiliatedHospitalHospitalofofChengdeChengdeMedicalMedicalCollegeCollegeHebeiHebeiChengdeChengde067000China067000China）ABSTRACTABSTRACT:ObjectiveObjective:Toexpletheeffectmechanismofbrev

6、iscapineagainstmyocardialischemiareperfusioninjuryinrats.MethodsMethods:40SDratsweredividedintoshamoperationgroupischemiareperfusiongroupbreviscapinegroupromly.Ratsinbreviscapinegroupwereinjectedwithbreviscapine25、50mg.k

7、g1.d1respectivelypritoischemiareperfusion.othertwogroupsweregivenNSinsteadofbreviscapineequallyataweekbefetheoperation.Theischemiareperfusionheartmodelwasestablishedbyligatingtheleftanteridescendingbranchofconaryartery.A

8、poptosisofmyocyteswasdetectedafteroperationinallgroupsbyflowcytometrywithAnnexinⅤEGFPpropidiumiodiode(PI)staining.Theultrastructuralalterationswereobservedunderthetransmissionelectronmicroscopy.ResultsResults:breviscapin

9、ecoulddecreasetheoccurrencerateofmyocardialapoptosisduringischemiareperfusioninjuryobviously（P＜0.05，P＜0.01）Thedegreeofinjuringonultrastructuresofmyocardialcellinbreviscapinegroupisratheralleviatedthaninischemiareperfusio

10、ngroup.ConclusionConclusion:breviscapinemayprotectmyocardialcellsduringischemiareperfusioninjurytheprotectivemechanismmaybeobtainedbyinhibitingmyocardialapoptosis.KEYKEYWDSWDSbreviscapineapoptosisCardiomyocyteischemiarep

11、erfusionmyocardiacultrastructures心肌缺血再灌注可導(dǎo)致心肌細胞死亡凋亡在心肌細胞死亡中發(fā)揮了重要的作用[12]。細胞凋亡的多少決定著缺血再灌注心肌損傷的嚴重程度，有效抑制細胞凋亡的發(fā)生和發(fā)展，是促進缺血再灌注后心功能恢復(fù)和減輕心肌致死性損傷的一條重要途徑。近年來研究發(fā)現(xiàn)在引發(fā)缺血之前使用藥物預(yù)處理可減少缺血再灌注損傷縮小急性心肌缺血所致的梗塞面積[3]抑制缺血再灌注過程中心肌細胞凋亡和超微結(jié)構(gòu)損傷[4]。

12、燈盞花素具有活血化瘀，抗血小板凝集等多種作用，在臨床上有著廣泛的應(yīng)用，但它對缺血再灌注損傷的保護作用及機制尚不清楚。本研究旨在觀察缺血再灌注后大鼠心肌細胞凋亡的特點和燈盞22心肌細胞超微結(jié)構(gòu)改變221假手術(shù)組：心肌細胞超微結(jié)構(gòu)變化輕微，粗細肌絲清晰可見，肌小節(jié)一致，肌原纖維明暗帶清楚，線粒體結(jié)構(gòu)正常，嵴排列規(guī)則。（圖５）22２缺血再灌注組：心肌細胞嚴重水腫，部分肌節(jié)周期性結(jié)構(gòu)破壞，肌絲斷裂、溶解，線粒體腫脹，嵴部分斷裂，染色質(zhì)濃縮邊集，

13、呈新月體樣改變。（圖６）22３燈盞花素組：較缺血再灌注組心肌纖維超微結(jié)構(gòu)損傷程度明顯減輕，多數(shù)心肌纖維仍腫脹，線粒體輕度腫脹，外膜完整，肌原纖維較規(guī)則。肌膜不平整，肌漿網(wǎng)輕度擴張，凋亡細胞明顯減少。（圖７）３討論近年來，盡管再灌注治療方法迅速發(fā)展，包括溶栓、PCI及GABG，但急性心肌梗死死亡率仍很高，再灌注損傷是主要原因之一。因此，減輕再灌注損傷具有重要的臨床意義。心肌缺血再灌注損傷可以產(chǎn)生4種類型的心功能障礙：心肌頓抑、無復(fù)流現(xiàn)象、

14、再灌注心律失常和致死性再灌注損傷。研究發(fā)現(xiàn)細胞凋亡參與心肌缺血再灌注損傷過程[7]。抑制心肌細胞凋亡能夠減少缺血再灌注后的心肌梗死體積幾乎達到50%～70%，改善心功能[8]。因此抗凋亡對防治心肌缺血再灌注損傷具有十分重要的意義。為了防治心肌缺血再灌注損傷，人們進行了多方面的研究。研究證實，有些中藥可保護缺血再灌注心肌且毒副作用較小[9，10]。本實驗應(yīng)用燈盞花素使缺血再灌注大鼠心肌細胞凋亡減少，超微結(jié)構(gòu)減輕，得到了與上述研究一致的結(jié)果

15、[11]。Kajstarn等[12]研究發(fā)現(xiàn)，梗塞后急速、大量的心肌細胞缺失是由壞死所致，而隨后心肌細胞的缺血性死亡則與凋亡有關(guān)。本實驗IR組在缺血邊緣區(qū)由于存在側(cè)枝循環(huán)和終末端動脈吻合，心肌缺血缺氧的情況較輕，心肌受到的損傷程度較小，但卻觸發(fā)了內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶激活途徑，出現(xiàn)染色質(zhì)濃縮邊集，呈新月體樣改變的心肌細胞凋亡改變，與Kajstarn等研究結(jié)果一致。有研究表明[1315]，氧化應(yīng)激、鈣反常、炎癥反應(yīng)及細胞凋亡等均參與了心肌缺血再

16、灌注損傷，細胞凋亡是再灌注損傷發(fā)病機制中的一個重要環(huán)節(jié)。燈盞花素是國內(nèi)臨床上治療心腦血管疾病的常用藥之一，它是從中藥燈盞花中分離得到的黃酮類化合物現(xiàn)代藥理研究表明燈盞花具有擴張血管、改善微循環(huán)、增強局部腦血流、抑制凝血因子Ⅳ活性、抑制蛋白激酶C移位激活、抗凋亡等作用[1617]。本實驗超微電鏡顯示燈盞花素使缺血中心區(qū)心肌細胞超微結(jié)構(gòu)損傷明顯減輕心肌細胞肌原纖維排列較整齊凋亡心肌細胞減少，流式細胞儀法顯示心肌細胞凋亡指數(shù)顯著低于IR組。不

17、同濃度燈盞花素對心肌細胞超微結(jié)構(gòu)損傷和心肌細胞凋亡均有明顯的抑制作用且有隨濃度增高效果越顯著但達到一定濃度后保護作用就不再明顯提高。證實燈盞花素對缺血再灌注心肌細胞有保護作用，其機制可能通過抑制心肌細胞凋亡實現(xiàn)的。參考文獻：[1]KovacevicMSimicOJonjicNetal.Apoptosiscardiopulmonarybypass.JCardSurg200722:129.[2]FreudeBMastersTNRobicse

18、kFetal.Apoptosisisinitiatedbymyocardialischemiaexecutedduringreperfusion[J].JMolCellCardiol200032(2):197.[3]姜淑芳鞏曉興苗中云.白藜蘆醇對心肌缺血再灌注損傷的保護作用及機制研究[J].解放軍保健醫(yī)學(xué)雜志20079(1):34.[4]趙淑敏孔祥玉周健等.黃芪預(yù)處理對缺血再灌注大鼠心肌超微結(jié)構(gòu)的保護作用[J].中國臨床康復(fù)20059(