蛋白質(zhì)各種定量方法的優(yōu)缺點的比較

1、蛋白質(zhì)各種定量方法的優(yōu)缺點的比較蛋白質(zhì)各種定量方法的優(yōu)缺點的比較1蛋白質(zhì)的常規(guī)檢測方法蛋白質(zhì)的常規(guī)檢測方法1.1凱氏（凱氏（Kjeldahl）定氮法）定氮法一種最經(jīng)典的蛋白質(zhì)檢測方法。原理原理：樣品中含氮有機化合物與濃硫酸在催化劑作用下共熱消化含氮有機物分解產(chǎn)生氨氨又與硫酸作用變成硫酸銨。然后加堿蒸餾放出氨氨用過量的硼酸溶液吸收再用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定求出總氮量換算為蛋白質(zhì)含量。優(yōu)點優(yōu)點：范圍廣泛、測定結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好缺點缺點：操作復(fù)雜費

2、時、試劑消耗量大1.2雙縮脲法雙縮脲法常用于需要快速但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)檢測。原理原理：雙縮脲（NH3CONHCONH3）是3分子的脲經(jīng)180℃左右加熱，放出1分子氨后得到的產(chǎn)物。在強堿性溶液中，雙縮脲與硫酸銅形成紫色絡(luò)合物（肽鍵中的氮原子和銅離子配價結(jié)合），稱為雙縮脲反應(yīng)。紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，因此可用來測定蛋白質(zhì)含量。測定范圍：1~10mg（有的文獻記載為1~20mg）優(yōu)點優(yōu)點：較快速，干擾物質(zhì)少，不同蛋白質(zhì)

3、產(chǎn)生的顏色深淺相近缺點缺點：①靈敏度差；②三羥甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等會干擾該反應(yīng)。1.3Folin酚試劑法酚試劑法原理：原理：Folin酚法的原理與雙縮脲法大體相同，利用蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合產(chǎn)生雙縮脲反應(yīng)。同時也由于Folin酚試劑中的磷鉬酸磷鎢酸試劑被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產(chǎn)生深藍色的鉬藍和鎢藍的混合物。在一定的條件下藍色深度與蛋白的量成正比，由此可測定蛋白質(zhì)的含量。測定范圍：20~250ug優(yōu)點優(yōu)點：靈

4、敏度高，對水溶性蛋白質(zhì)含量的測定很有效缺點缺點：①費時，要精確控制操作時間；②Folin酚法試劑的配制比較繁瑣且酚類和檸檬酸、硫酸銨、Tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油、還原劑(二硫代蘇糖醇、巰基乙醇)、EDTA和脲素均會干擾反應(yīng)。3.蛋白質(zhì)的分子生物學(xué)檢測方法蛋白質(zhì)的分子生物學(xué)檢測方法3.1鄰位連接技術(shù)鄰位連接技術(shù)原理原理：首先將不同的DNA單鏈分別與蛋白質(zhì)識別分子相結(jié)合形成PLA探針，經(jīng)過類似酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）中的溫育過程

5、，2條含有不同DNA序列的PLA探針會同時結(jié)合到同一個待測蛋白質(zhì)分子上。此時，2條探針的DNA尾部便在空間上緊密靠近。在過量的互補連接序列和NDA連接酶的作用下，2條探針DNA尾部的游離5’端和3’端與互補序列雜交并發(fā)生連接反應(yīng)，形成一個環(huán)狀的蛋白質(zhì)蛋白識別分子單鏈DNA復(fù)合物。該復(fù)合物量的多少，完全取決于樣品中待測蛋白質(zhì)分子的量，故可用于蛋白質(zhì)的定量分析。優(yōu)點優(yōu)點：檢測靈敏度高、檢測特異性強、樣品損耗低、操作簡單、檢測設(shè)常見3.2核酸

6、適體核酸適體原理原理：直接在核酸適體上共價修飾熒光基團，利用它與靶分子結(jié)合時熒光信號的變化實現(xiàn)對靶分子的檢測。修飾有熒光熄滅基團的核酸適體探針通過靜電作用與陽離子熒光共軛聚合物結(jié)合，導(dǎo)致后者熒光熄滅，當(dāng)加入靶蛋白后，核酸適體探針與其特異性結(jié)合，熒光熄滅基團與陽離子熒光共軛聚合物遠離，聚合物熒光信號得以恢復(fù)。優(yōu)點優(yōu)點：檢測限低，檢測線性范圍廣3.3電泳法電泳法原理原理：電泳法就是指帶電荷的供試品（如蛋白質(zhì)、核苷酸等）在惰性支持介質(zhì)（如濾紙

7、、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等）中，在電場的作用下，向其對應(yīng)的電極方向按各自的速度進行泳動，由于各組分之間的移動速度不同，使各組分分離成狹窄的區(qū)帶，并用適宜的檢測方法記錄其電泳區(qū)帶圖譜或計算其百分含量。優(yōu)點優(yōu)點：操作簡便、快速、樣品用量少、高自動化。缺點缺點：存在核酸、多糖、脂類等干擾分子，影響檢測結(jié)果。3.4二甲酸喹啉（二甲酸喹啉（BCA）法）法原理原理：在堿性溶液中，蛋白質(zhì)將Cu2還原成Cu，BCA與Cu結(jié)合形成穩(wěn)定的藍