植物組織培養(yǎng)的污染問題

1、1、真菌的污染真菌(fungi)一類沒有葉綠素，異養(yǎng)的真核微生物。除極少數(shù)種類是單細胞外，絕大多數(shù)是由多細胞組成的菌絲，結(jié)成一團的菌絲稱菌絲體，菌絲分有隔菌絲和無隔菌絲兩種。有隔菌絲是由多個細胞組成，相鄰的細胞之間由隔絲隔開。在地球上廣泛存在于空氣、水、土壤以及各類生物的體表或體內(nèi)。皆可有真菌生長。大氣中已知的真菌有11255屬10萬種，在室內(nèi)常附著在物體表面，能自動或隨人的活動而擴散。種類豐富，分布廣泛，繁殖快速，無處沒有，無處不在。

2、一個季節(jié)繁殖45代，孢子可達1萬億個室內(nèi)真菌種類：主要有芽枝孢霉屬、曲霉屬、鉸鏈孢霉屬、鐮刀霉屬、青霉屬等，真菌數(shù)量的多少，與溫度、濕度有很大關(guān)系。真菌以腐生、寄生或共生的型式進行異營性生活。釋放消化酵素於鄰近的環(huán)境，以分解食物成較小的水溶性分子進入細胞內(nèi)消化。並可於菌絲產(chǎn)生孢子以完成有性或無性繁殖。真菌季節(jié)變化：春、夏季尤其是南方的梅雨時節(jié)溫暖潮濕，非常適合真菌生長。冬季室內(nèi)真菌濃度較高?？照{(diào)加重污染：如果長期使用空調(diào)而不注意通風，可

3、引起室內(nèi)真菌污染。室內(nèi)有空調(diào)比沒有空調(diào)情況下曲霧菌落數(shù)多4倍。2、細菌（bacteria）的污染細菌是一類微小的單細胞生物，約有２０００多種。從形態(tài)上看，細菌可以分成球菌、桿菌和螺旋菌３類。細菌是無孔不入的微生物，兒童玩具、手機、計算機鍵盤和衣服上，甚至植入人體的醫(yī)用植入物等（如心臟起搏器），都隨時有可能沾染細菌，對人體造成危害。為避免細菌的侵襲，科學家曾嘗試用抗微生物材料生產(chǎn)各種用品，但效果不十分理想，因為這些材料雖然能殺死細菌，卻充

4、滿化學物質(zhì)。細菌是處于生物和無生物之間的東西。泥土里、水里、都市的空氣里都有細菌散布著，多到50種以上。三類細菌的形狀：就是球形的，桿形的，及螺旋的。球形的有的正圓，有的卵圓；桿形的有長有短，有的微彎螺旋形的也有長短和彎曲的轉(zhuǎn)數(shù)多少的不同，有的生著細毛，毛長與短多少不定。雖然概括地說，形狀只有球形、桿形、螺旋形這幾種，但細分起來，形狀還是很不少。論大小，它長約1～2微米，闊0.5微米余。病菌，能分泌出毒質(zhì)，如果寄生在體里，因病菌種類的不

5、同，人就會發(fā)生不同的疾病。3、組織培養(yǎng)過程中的污染源[1]。戶外風大菌類進屋機會多[2]。屋內(nèi)太潮菌類繁衍多[3]。物品帶菌多[4]。屋內(nèi)不干凈[5]。屋內(nèi)清理帶菌組培苗[6]。接種不正確4、菌類傳播途徑[1]戶外風傳播細小如塵隨風飄散由上下落見濕就長有風就有沙有沙就有塵有塵就有菌菌塵混共存[2]渦流傳播我們在大街上常?？吹揭恍┐筘涇囻傔^后，馬路上的塵土、紙屑打著轉(zhuǎn)滿天飛，這就是汽車行駛攪動空氣形成的渦流。汽車的前擋風玻璃、車頂、車側(cè)、

6、車后都可以產(chǎn)生渦流。渦流在自然界可說是無所不在，在這些渦流中人們?nèi)羰窍胍^察渦流旋轉(zhuǎn)方向改變的話就必須將整個渦流給破壞掉。超凈工作臺上，擺放物品太多，當無菌風吹過時，就會在物品周圍形成渦流群，菌類就會在渦流群中停留，從而降低凈化效果，增加污染機會。[3]接種傳播臟手每只帶有細菌4萬~40萬，干凈的手，指甲蓋大小也有3200多個細菌。指甲縫可以窩藏30多種細菌。1克重的指甲垢里竟藏有38億個細菌。洗的手3小時后，在大拇指的細菌由原來的30

7、0個變成30萬個。如果手上帶菌較多，在操作過程中，就難免有菌落入培養(yǎng)基或植物材料上，而導致污染。用肥皂洗手比不用肥皂洗手的殺菌功效要大8~10倍。流動的溫水可去掉95%以上。因此，在注意個人衛(wèi)生的同時，操作前一定要對手進行徹底消毒。另外，不正確操作也會增加污染機率掀蓋生硬，滅菌不夠，操作過慢等。接種過程應(yīng)該輕開蓋，火滅慢，操作快。5、相應(yīng)的措施通風：經(jīng)常開窗，保持室內(nèi)空氣流通可以使室內(nèi)真菌數(shù)量減少。通風方法簡便易行應(yīng)多使用。去濕：保持室

8、內(nèi)空氣干燥，如使用空調(diào)“除濕”功能，也可減少真菌生長繁殖。光照：紫外線能殺滅或抑制真菌生長，有調(diào)查發(fā)現(xiàn)下午一時是大氣細菌粒子沉降的一個低谷，說明太陽輻射對空氣微生物有明顯的殺滅作用。因此，保持室內(nèi)較好采光，在梅雨季節(jié)后將衣物等晾曬，對減少室內(nèi)真菌污染大有好處。防霉：污染物品和污染培養(yǎng)基不要在培養(yǎng)室近距離開瓶洗刷。2影響污染的因素21外植體本身植物組織培養(yǎng)的成敗除與培養(yǎng)基的組分有關(guān)外，另一個重要因素就是外植體本身，即由活體植物上切取下來，

9、用以進行離體培養(yǎng)的那部分組織或器官。為了使外植體適于在離體條件下生長，使組織培養(yǎng)工作順利進行，有必要對外植體進行選擇與處理。首先，應(yīng)該從田間或溫室中生長健壯的無病蟲害的植株上選取發(fā)育正常的器官或組織作為外植體，離體培養(yǎng)易于成功。對于大多數(shù)植物來說，莖尖是較好的外植體，由于莖形態(tài)已基本建成，生長速度快，遺傳性穩(wěn)定，病毒含量低或無病毒，所以是獲取無病毒苗的良好途徑。但是，不同植物的不同部位，由于其本身的生長特點，在外植體培養(yǎng)中也存在著各種差

10、異性。比如，各部位的分化再生能力不同，各部位接種后的污染率也不同，各部位培養(yǎng)形成的再生植株的脫毒率也不同。所以選取外植體時應(yīng)選擇適當大小的、病毒含量低的、易于消毒和滅菌的外植體，這樣才能保證在組織培養(yǎng)中污染率低、脫毒率高、成活率高。如在芳香植物唇萼薄荷的組織培養(yǎng)中，由于其組織非常柔嫩且表面密生絨毛，在自然條件下，表面常被霉菌和細菌污染。所以在培養(yǎng)時，選取去掉葉片的帶腋芽的幼嫩莖段進行繁殖，這樣既能降低污染率(因為去除了污染率較高的葉片)

11、，又能提高成活率。還如在廣佛手的組織培養(yǎng)中，不同外植體的頂芽的污染率最低，成活率最高，葉片次之，帶節(jié)莖的污染率最高。另外，不同季節(jié)取材的外植體，污染率也不同。如在廣佛手的培養(yǎng)中，春季取材與秋季取材差別不大，夏季污染率就高，明顯高于冬季。因此，適當?shù)臅r候取材會降低污染率。所以，為了降低污染率、提高成活率選取外植體應(yīng)該從多方面考慮。2.2培養(yǎng)條件在培養(yǎng)室內(nèi)的培養(yǎng)條件中，溫度和濕度與污染率密切相關(guān)。外植體在夏季培養(yǎng)時，由于夏天高溫高濕有利于雜

12、菌滋長，所以污染率就高；冬季培養(yǎng)時，污染率就相對低一些。如在廣佛手、矮牽牛、菊花、樹莓的組織培養(yǎng)中，外植體在夏季污染率和死亡率就高；在冬季就相對低一些。此外，一些用于組織培養(yǎng)的植物，在自然條件下的生長環(huán)境也會影響污染率。有報道指出，生長在高溫多雨的熱帶、亞熱帶植物和多年生木本植物容易出現(xiàn)內(nèi)生細菌的污染。內(nèi)生細菌存在于植物材料內(nèi)部，不能被一般的表面消毒方法所清除，隨著材料帶人培養(yǎng)過程引起污染。3防止措施組織培養(yǎng)中降低污染率是不可忽視的技術(shù)

13、環(huán)節(jié)。以下是在矮牽牛、菊花、樹莓等的組織培養(yǎng)中總結(jié)出來的幾點污染防止措施。31外植體的采集為了防止材料帶菌，我們在采集外植體時，應(yīng)注意以下幾點：在生長健壯的無病蟲害的植株上選取發(fā)育正常的組織或器官；或?qū)⒛凵也杉貋恚旁跐崈舻目諝庵兴喑檠?，然后用這種新生組織培養(yǎng)，也可以避免污染。在晴天中午采集外植體。采集易于消毒和滅菌的組織部位進行培養(yǎng)，也可以降低污染率。32材料的表面消毒外植體在接種之前，須經(jīng)嚴格的滅菌。由于滅菌劑的種類不同，殺菌力

14、不同，因此選擇消毒劑，既要考慮具有良好的消毒、殺菌作用，同時又易被蒸餾水沖洗掉或能自行分解的物質(zhì)，而且不會損傷或輕微損傷組織材料，而不影響生長。植物種類不同，外植體不同，處理也不同。為了獲取無菌材料，對室外采集來的外植體，先用自來水沖洗干凈，然后根據(jù)材料的不同，選用不同種類的滅菌劑，進行不同時間的表面滅菌。選擇適宜的消毒劑處理時，為了使其消毒效果更為徹底，有時還需與黏著劑或潤濕劑如吐溫及抽氣減壓方法、磁力攪拌、超生振動等方法配合使用，使