植物組織培養(yǎng)筆記(完整)

1、1第一章緒論植物繁殖方式：分株、播種、壓條、扦插、嫁接、組培繁殖一、組培的概念：狹義：在無菌條件下，將離體的植物組織小塊，在適宜的人工培養(yǎng)和環(huán)境條件下進(jìn)行無菌培養(yǎng)，使培養(yǎng)體逐步分化出器官，一個組織或單個細(xì)胞（甚至用原生質(zhì)）接種到培養(yǎng)基，在人工控制的條件下（包括營養(yǎng)、激素、溫度、光照等人進(jìn)行培養(yǎng)，使其形成完整植株的過年。）廣義：通過無菌操作，把植物體的一個器官、一種組織或單個細(xì)胞（甚至原生質(zhì)）接種到培養(yǎng)基，在人工控制的條件下（營養(yǎng)、激素、

2、溫度、光照等）進(jìn)行培養(yǎng)，使其成為完整植株的過程。狹義與廣義：組織范圍不同。二、組培發(fā)展史誕生1、植物組織培養(yǎng)技術(shù)的誕生可以追溯到19世紀(jì)末20世紀(jì)初。2、1839—1840年，施萊登和施旺創(chuàng)立了“細(xì)胞學(xué)說”。3、1902年，德國生理學(xué)家Haberlt提出了高等植物細(xì)胞全能性理論。4、1934年，美國White利用番茄根建立了第一個活躍生長的無性繁殖系，離體根的培養(yǎng)獲得成功。5、1943年White發(fā)表了《植物組織培養(yǎng)手冊》6、1962年

3、Marshing和Shong發(fā)明了MS培養(yǎng)基。GauthererWhiteNobecount一起被譽(yù)為組織培養(yǎng)學(xué)科的奠基人。組培發(fā)展1、1948年Skoog和崔徵通過對煙草莖切斷和髓培養(yǎng)組織研究確定了腺嘌呤，生長素是控制芽和根的生長。2、1956年Miller等發(fā)明了激動素?？刂破鞴俜只募に啬Ｊ阶?yōu)榧铀亍?、50年代至今，組培迅速發(fā)展1971年，Takebe在煙草上首次使用原生質(zhì)體獲得自身植株。1962年，印度Guha毛葉曼陀羅花藥

4、培養(yǎng)1973年，Carlson兩個煙草物種原生質(zhì)體融合1983年，Zambryski用根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化煙草轉(zhuǎn)基因植物1978年，Murashige提出“人工種子”的概念。三、組培術(shù)語1、外植體（explant）:從植物體分離下來用于離體培養(yǎng)的材料；2、愈傷組織（callus）:在離體培養(yǎng)過程中形成的具有分生能力的一團(tuán)不規(guī)則細(xì)胞，躲在植物體切面產(chǎn)生。3、分化（differentiation）:細(xì)胞在分裂過程中發(fā)生結(jié)構(gòu)和功能上的改變，從而在個

5、體發(fā)育中形成各類組織和器官完成整個生活周期。4、脫分化(differentiation)：原已分化的細(xì)胞，失去原有的形態(tài)功能，又恢復(fù)到?jīng)]有分化的霧組織的細(xì)胞團(tuán)和愈傷組織，（即轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)）這個過程稱為脫分化。5、再分化（redifferentiation）:在一定的培養(yǎng)條件下，經(jīng)過脫分化的組織和細(xì)胞，經(jīng)重新分化而產(chǎn)生新的組織和器官（如由愈傷組織形成芽、根或胚狀體），稱為再分化。6、胚狀體（embroid）：在組織培養(yǎng)中，從一個非合子細(xì)

6、胞，通過合子胚相似的胚胎發(fā)生過程所形成的胚狀結(jié)構(gòu)。7、初代培養(yǎng)(firstculture)：外植體的第一次培養(yǎng)。3（一）洗滌室（cleaningroom）大型水槽，最好是白瓷水槽、鋪墊橡膠、上下水道要暢通、塑料筐（二）準(zhǔn)備室洗滌室配置室=準(zhǔn)備室（化學(xué)實(shí)驗(yàn)室）1.設(shè)備及器具：1）大型工作臺：用于配置培養(yǎng)基母液和培養(yǎng)基等，其高度應(yīng)方便配制工作；2）藥品柜：用于放置常用藥品。3）普通冰箱4）電子分析天平和托盤天平用于稱取大量元素、微量元素、維

7、生素、激素等微量藥品準(zhǔn)確為0.0001g。5）電蒸餾器6）電爐或微波爐：用于瓊脂的溶解7）酸度計8）培養(yǎng)基分裝設(shè)備9）高壓滅菌鍋：必備的10）恒溫培養(yǎng)箱：生化培養(yǎng)箱、光照培養(yǎng)箱、人工氣候室、植物生長箱11）烘箱：用于干燥需要保持80—100℃；干熱滅菌需要保持150℃，達(dá)1—3h。2.滅菌室（三）接種室（無菌操作室tranaferingroom）宜小不宜大，一般8平方米，吊裝1—2盞紫外線滅菌燈。超凈臺（cleaningtable）：有

8、水平式，垂直式、單人操作和雙人操作。解剖鏡：通常放大5—80倍；帶有照相裝置。無菌操作的器具：酒精燈、鑷子、解剖刀、解剖刀片、醫(yī)用剪、廣口瓶（四）培養(yǎng)室（culturingroom）:作用：用于培養(yǎng)接種的植物材料，培養(yǎng)室要求具有一定的照明及控溫、控濕設(shè)備（全自動）。具有以下條件1、溫度：15℃或23—28℃左右，安裝空調(diào)設(shè)備；2、濕度：70%—80%之間，可安裝加濕器；3、光照：1500—3000lx4、時間：10—16h，控制日照時間

9、，可安裝定時開關(guān)；注意長日照植物與短日照植物對光的需求。5、培養(yǎng)架6、搖床及轉(zhuǎn)床二、玻璃器皿及用具：試管、三角瓶、培養(yǎng)皿等。（一）對玻璃器皿的要求：1、耐腐蝕，耐高溫，高壓；2、透明3、易于放外植體（口徑大）（二）規(guī)格要求：1、長試管：2.0x15cm2.5x153.0x15。2、三角瓶：一般用于液體培養(yǎng)，50—250ml口徑在2.5—3.0cm3、培養(yǎng)皿：用于固體培養(yǎng)基，特別用于轉(zhuǎn)基因植物葉片培養(yǎng)4、T型試管和L型試管5、培養(yǎng)瓶6、封