微藻分離及保存

1、1用液體培養(yǎng)基分離培養(yǎng)的方法用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)分離的藻種首先要配制培養(yǎng)液液體培養(yǎng)基通常用消毒海水按常規(guī)配方(例如F2培養(yǎng)基)配制或者根據(jù)不同的微藻采用其專用的培養(yǎng)基配方。分離和培養(yǎng)的工具、器皿要進行高溫滅菌。1.1樣品系列稀釋分離法1.1.1原理在無菌操作的條件下對分離的樣品采用逐步稀釋的方法邊稀釋邊在顯微鏡下鏡檢直到視野中每滴樣品只含1個細胞時即停止稀釋開始分接培養(yǎng)。1.1.2方法首先在第一個試管中加入要分離的藻液樣品其他試管中加入等量

2、培養(yǎng)液加入培養(yǎng)液的體積根據(jù)分離樣品的具體情況而定(如10ml)從第一試管中吸取和培養(yǎng)液同體積的藻液樣品(10mL)加到第二支試管中充分振蕩搖勻此時藻液被稀釋了2倍再用一支新的消毒的移液管吸取第二支試管中的稀釋藻液(10mL)加入第三支試管中如前振蕩使均勻稀釋此時藻液被稀釋了4倍以后的試管依次采用同樣的方法稀釋直到鏡檢每滴稀釋樣品中只有1個細胞可以用這樣的稀釋藻液進行培養(yǎng)最終的稀釋液種分裝到不同的試管中用棉塞塞好試管把試管放在有漫射陽光的

3、地方每日輕輕搖動幾次發(fā)現(xiàn)試管中有藻色后進行鏡檢如鏡檢到單種則表示分離成功此時已達到了分離、純化的目的可進行擴大培養(yǎng)。且適于分離個體較大或絲狀的藻類如螺旋藻、骨條藻等較小的藻類用此方法比較困難。1.3水滴分離法1.3.1原理在無菌操作的條件下把要分離的藻樣用微吸管在玻片上滴成大小合適的小水滴鏡檢水滴中只有一個要分離的單種即可沖入試管培養(yǎng)。1.3.2方法用小燒杯裝稀釋的藻樣將微吸管插入藻樣中提取微吸管讓多余的藻液滴出然后把管口與消毒過的載玻

4、片接觸即有一個小水滴留在載玻片上。一個載玻片滴3~4滴間隔一定距離然后在顯微鏡下觀察。若一個水滴中只有一個需要分離的藻細胞(無其他生物混雜)即用移液管吸取培養(yǎng)液把該水滴沖入試管中試管口塞上棉塞放在適宜的條件下培養(yǎng)。該分離法的關鍵是藻樣稀釋要適宜(稀釋至每個水滴約有1~2藻細胞)水滴大小適宜以在低倍鏡下能看到水滴全部或大部分為宜并且觀察要準確、迅速。1.3.3應用水滴分離法操作簡便易行但具體操作中要注意上面提到的問題。此方法對于藻細胞的大