試驗(yàn)十抗心律失常藥物用研究目的

1、試驗(yàn)十 抗心律失常藥物用研究,一、目的,掌握心律失常病因及治療藥物作用機(jī)制。學(xué)習(xí)心律失常動(dòng)物模型建立方法及相關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo)的觀察。學(xué)習(xí)動(dòng)物試驗(yàn)基本技術(shù)-大鼠捉拿、固定及不同途徑給藥方法。學(xué)習(xí)動(dòng)物血壓測(cè)量的方法。觀察受試化合物抗心律失常作用。,二、與試驗(yàn)相關(guān)的理論知識(shí)要點(diǎn),1.抗心律失常藥物及作用機(jī)制心臟內(nèi)的激動(dòng)起源或者激動(dòng)傳導(dǎo)不正常，引起整個(gè)或部分心臟的活動(dòng)變得過(guò)快、過(guò)慢或不規(guī)則，或者各部分的激動(dòng)順序發(fā)生紊亂，引起心臟跳動(dòng)的速率或

2、節(jié)律發(fā)生改變，就叫心律失常。,2.常見(jiàn)心律失常模型如下：,電刺激貓或家兔心臟誘發(fā)的心律失常。 觀察指標(biāo)：測(cè)定室顫閾。結(jié)扎冠脈前降支形成的心律失常。大鼠冠脈結(jié)扎、狗冠脈兩期結(jié)扎。 記錄Ⅱ?qū)CG并觀察： ①心律失常(室早VP，室速VT)出現(xiàn)的時(shí)間、心律失常程度(VP、VT數(shù))、藥物作用維持時(shí)間、恢復(fù)竇性心律動(dòng)物數(shù)/動(dòng)物總數(shù)。 ②房顫或室顫發(fā)生率和死亡率。,藥物誘發(fā)的心律失常： ①腎上腺素或氯仿-腎上腺素引起

3、室性心律失常； ②洋地黃引起室性心律失常； ③烏頭堿引起室性心律失常； ④氯化鋇或氯化鈣引起室性心律失常； ⑤電刺激心室引起心室顫動(dòng)。由于各類(lèi)抗心律失常藥物的作用機(jī)理不同，因此當(dāng)知道所試藥物屬于何類(lèi)時(shí)，應(yīng)選擇相應(yīng)的敏感模型。,三、教學(xué)試驗(yàn)安排及內(nèi)容,教學(xué)分組 在一個(gè)教學(xué)單元內(nèi)，根據(jù)學(xué)生人數(shù)，將學(xué)生分為8組， 每組2～5人，并分成上下兩班，4組/班。試驗(yàn)方案 1.上半班采用腎上腺素造模，普萘洛爾作為

4、陽(yáng)性對(duì)照藥。 2.下半班采用氯化鈣造模，維拉帕米作為陽(yáng)性對(duì)照藥。 3.上下半班均采用同一受試物進(jìn)行觀察，通過(guò)藥物對(duì) 不同心律失常模型的作用，初步探討藥物可能的機(jī)制。,四、試驗(yàn)方法及步驟,（一）試驗(yàn)材料1.動(dòng)物：大鼠250～300g，雌雄各半。2.藥品：生理鹽水；5%葡萄糖輸液；0.5％肝素 ；烏拉坦（Urethane），生理鹽水配制成20%溶液備用；鹽酸維拉帕米（Verapmil Hydrochoride），配成0.2%溶

5、液備用；鹽酸普萘洛爾（Propranolol Hydrochoride），配成0.1%溶液備用；腎上腺素，生理鹽水配制成0.01%溶液備用；氯化鈣，生理鹽水配制成3.5%溶液備用；,3.受試物：由各教學(xué)單位自備。 建議受試物，丹參酮ⅡA磺酸鈉，配制成5%葡萄糖 配制成0.2%、1%備用。4.器材：生物機(jī)能試驗(yàn)系統(tǒng)、動(dòng)物秤、大鼠手術(shù)臺(tái)、1ml、5ml注射器、靜脈留置針、5#、6#針頭。,（二）試驗(yàn)步驟,1.取大鼠，稱(chēng)體重；

6、2.腹腔注射烏拉坦1～2g/kg（20%，5～6ml/kg）麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上；3.分離頸總動(dòng)脈，作頸總動(dòng)脈插管術(shù)測(cè)定血壓； (1)剪開(kāi)頸部皮膚，可用止血鉗鈍性分離頸部皮膚，在氣管旁邊找到右側(cè)頸總動(dòng)脈，此處注意勿損傷表面的細(xì)小血管，而導(dǎo)致手術(shù)視野不清楚。,,,（2)頸總動(dòng)脈彈性較大，分離頸總動(dòng)脈后， 使用眼科鑷進(jìn)一步分離1厘米左右的長(zhǎng)度。,,,（3）穿手術(shù)線(xiàn)，一根用來(lái)結(jié)扎遠(yuǎn)心端，一根備用； 用動(dòng)脈夾

7、暫時(shí)封閉近心端。,,,(4)用眼科鑷的柄放置在右側(cè)頸總動(dòng)脈管下，做為插管的依托，然后用留置針向心方向插入血管，直到動(dòng)脈夾處，然后拔出留置針中的金屬針，留下外面的塑料套管。,,(5)用備用的手術(shù)線(xiàn)結(jié)扎塑料套管。 隨后去掉動(dòng)脈夾，測(cè)定血壓。,,4.針型電極插入大鼠皮下，打開(kāi)生物機(jī)能試驗(yàn)系統(tǒng)，待心電圖穩(wěn)定后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，先記錄一段正常的大鼠心電圖；,,5.靜脈給藥（可采用舌下靜脈給藥等方式）,給藥順序-上半班：,（1）靜脈注射生理鹽水1ml/k

8、g，5min后；（2）靜脈快速注射0.01%腎上腺素溶液1ml/kg，記錄大鼠血壓、心 電圖，恢復(fù)正常后進(jìn)行下一輪實(shí)驗(yàn)。（3）靜脈注射0.1%普萘洛爾1ml/kg，5min后；（4）靜脈快速注射0.01%腎上腺素溶液1ml/kg，記錄大鼠血壓、心 電圖，恢復(fù)正常后進(jìn)行下一輪實(shí)驗(yàn)；（5）靜脈注射0.2%丹參酮ⅡA磺酸鈉1ml/kg，5min后；（6）靜脈快速注射0.01%腎上腺素溶液1ml/kg，記錄大鼠血

9、壓、心 電圖，恢復(fù)正常后進(jìn)行下一輪實(shí)驗(yàn)；（7）靜脈注射1%丹參酮ⅡA磺酸鈉1ml/kg，5min后；（8）靜脈快速注射0.01%腎上腺素溶液1ml/kg，記錄大鼠血壓、心 電圖，恢復(fù)正常后進(jìn)行下一輪實(shí)驗(yàn)。,下半班：,（1）靜脈注射生理鹽水1ml/kg，5min后；（2）靜脈快速注射3.5%氯化鈣溶液4ml/kg，記錄大鼠血壓、心 電圖，恢復(fù)正常后進(jìn)行下一輪實(shí)驗(yàn)。（3）靜脈注射0.2% 維拉帕米1ml

10、/kg，5min后；（4）靜脈快速注射3.5%氯化鈣溶液4ml/kg，記錄大鼠血壓、心 電圖，恢復(fù)正常后進(jìn)行下一輪實(shí)驗(yàn)；（5）靜脈注射0.2%丹參酮ⅡA磺酸鈉1ml/kg，5min后；（6）靜脈快速注射3.5%氯化鈣溶液4ml/kg，記錄大鼠血壓、心 電圖，恢復(fù)正常后進(jìn)行下一輪實(shí)驗(yàn)；（7）靜脈注射1%丹參酮ⅡA磺酸鈉1ml/kg，5min后；（8）靜脈快速注射3.5%氯化鈣溶液4ml/kg，記錄大鼠血壓、心

11、 電圖，恢復(fù)正常后進(jìn)行下一輪實(shí)驗(yàn)。,學(xué)生分組及試驗(yàn)給藥方案,記錄給藥后30s、1min、5min的心率、血壓變化，觀察并記錄心律失常出現(xiàn)的時(shí)間（OTR）、次數(shù)及竇性心率恢復(fù)時(shí)間（RTSR），待大鼠心率恢復(fù)正常后再給下一種藥。將試驗(yàn)結(jié)果記錄于表1、表2中。,試驗(yàn)結(jié)果原始記錄,表1 受試化合物對(duì)腎上腺素或氯化鈣誘發(fā)心律失常大鼠心率的影響,表2 受試化合物對(duì)腎上腺素誘發(fā)心律失常大鼠失常次數(shù)、時(shí)間的影響,表3 受試化合物對(duì)腎上腺素或氯

12、化鈣誘發(fā)心律失常大鼠血壓的影響,五、試驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容及格式要求,（一）題目 根據(jù)你的理解或興趣，可將報(bào)告題目擬定為： 1.丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)心律失常的預(yù)防作用及機(jī)制 初探；或 2.自定。（二）研究背景及意義 根據(jù)選擇的題目，說(shuō)明研究意義（為什么進(jìn)行上述的立項(xiàng)研究，為什么要設(shè)計(jì)以上試驗(yàn)，目的及意義何在（臨床對(duì)抗心率失常新藥需求的迫切性等）。,（三）試驗(yàn)方法 根據(jù)選擇的題目，描述試驗(yàn)方法。（四）試驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)

13、選擇的題目，處理數(shù)據(jù)，并以圖或表的形式 描述結(jié)果。（五）討論 分析結(jié)果，引用相關(guān)文獻(xiàn)，并進(jìn)行充分討論。 附件： 提交8個(gè)組的全部試驗(yàn)原始數(shù)據(jù)。,注意事項(xiàng)：,動(dòng)物個(gè)體較小，固定大鼠時(shí)尤其兩前肢不宜過(guò)緊，以免影響呼吸。在使用過(guò)程中，血壓換能器內(nèi)不能留有氣泡，否則影響測(cè)量的精確度。血壓換能器內(nèi)需充滿(mǎn)含有肝素的生理鹽水；每次使用完血壓換能器后，需要及時(shí)沖洗，防止血液凝固在管腔內(nèi)影響測(cè)量的精度。血壓換能器最好和桌面水平。

14、留置針需要用含有肝素的生理鹽水提前浸泡一下，一方面是為了抗凝，一方面是為了潤(rùn)滑管壁，方便插入血管。,,,心電圖機(jī)的針型電極應(yīng)向心插入皮下，不可插入肌肉內(nèi)，以免肌電干擾，另外動(dòng)物周?chē)灰胖媒饘僦破?，以免干擾。用血管鉗拉出舌頭，可以看到兩條清晰的舌下靜脈，可用連有4號(hào)注射針頭的注射器直接注入藥液，或以?xún)和妙^皮靜脈針插入后用靜脈夾固定，建立起穩(wěn)定的給藥通道。大鼠每次靜脈注射藥液量以0.5～1ml/100g為宜。 注射腎上腺素速度要快，