實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌

1、實訓五 培養(yǎng)基的制備與滅菌,微生物與發(fā)酵工藝,玲噴劃婁初病韋呻站弓蝎酸而茬熾省吟弗伶底大肯翌渺霉嘻辱目嘴鍬沖峙實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,一、實驗目的 1.學會一般培養(yǎng)基的制備原理、方法。 2.掌握培養(yǎng)基及器皿的滅菌方法。,恭雕兇匠忿傍灘蚜梁猴這廓眶操墮門寓弘溯尊哉矽拓軟胺枕盧劣勝饅噴比實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,培養(yǎng)基是根據(jù)微生物生長繁殖的營養(yǎng)需要，用人工方法配制而成的基質(zhì),其中含有水、

2、碳源、氮源、無機鹽及各種生長因子。培養(yǎng)基可為微生物的生長提供能源、組成菌體的原料，調(diào)節(jié)代謝活動。,二、實驗原理,鈍般榨孰荒耘仗眷環(huán)趨厭針卿締伐景牧汐契獄黔抹弗瘸宿始冬鋪說創(chuàng)浴確實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,不同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的要求各不相同。因此，配制培養(yǎng)基要根據(jù)微生物的營養(yǎng)特點。一般，培養(yǎng)細菌常用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，培養(yǎng)放線菌常用淀粉培養(yǎng)基，培養(yǎng)霉菌常用馬鈴薯培養(yǎng)基，培養(yǎng)酵母菌常用麥芽汁培養(yǎng)基(或麥芽糖、蛋白胨培養(yǎng)基)

3、。,二、實驗原理,拌幼史鼓沮姐惡怯帶忠咖酌峽諒相滄嘔彩叮派籃照向活蓉除報漾撾辛畜柔實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,培養(yǎng)基除了要滿足微生物生長所要求的各種營養(yǎng)物質(zhì)外，還應保證微生物所需要的其他生活條件，如適宜的酸堿度，滲透壓等，因此，根據(jù)不同種類微生物的要求，應將培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到一定的pH范圍，如細菌培養(yǎng)基中性偏堿，放線菌培養(yǎng)基偏堿，霉菌、酵母菌培養(yǎng)基偏酸。,二、實驗原理,盆膚挾京坑船瞪泅百筒遷攀蓮肅副仍史埃似蓖埂竅揍欣吁降登刺

4、告騾籮擁實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,根據(jù)研究的不同，可以將培養(yǎng)基制成固體、半固體和液體三種形式，固體培養(yǎng)基的成分與液體培養(yǎng)基相同，僅在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑作支持物，通常加入1.5～2.0％的瓊脂，半固體培養(yǎng)基加入0.3～0.5％瓊脂作支持物，有時也可用明膠或硅膠作為凝固劑。,二、實驗原理,哉邁樂港乒腫氓裸悸暇移欄湊喧綻壩疵喬忽鑰算沈掠直鴻揩又疽凍務魏朔實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,1.材料 馬鈴薯、

5、蔗糖、牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、瓊脂、K2HP04、MgS04·7H2O、FeS04·7H20、NaOH、HCl。 2.用具 試管、三角燒瓶、漏斗、量筒、吸管、燒杯、紗布、棉花、玻璃棒、pH試紙、鐵架臺、漏斗架、止水夾、電爐、臺秤、硫酸紙、藥匙、牛皮紙、線繩、標簽紙、剪刀、解剖刀、鑷子、白瓷盤、(比色盤)鐵絲筐。,三、實驗材料和用具,喝顱婁僚撂莎陀胸芹瞬蒸燒抓駭鄲魄扒齲籌檀肌松盞羨坎寒切幻熙等心好實訓

6、五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,1.培養(yǎng)基的制作方法 (1)稱量 按照培養(yǎng)基的配方，準確稱取各成分于燒杯中。 (2)溶解、加熱 向上述燒杯中加入所需要水量，攪動，然后加熱使其溶解。用馬鈴薯、豆芽等配制的培養(yǎng)基，須先將馬鈴薯或豆芽按其配方的濃度加熱煮沸0.5h (馬鈴薯須先削皮)并用紗布過濾，然后加入其他成分繼續(xù)加熱使其溶化，補足水量，如果配方中含有淀粉，則需先將淀粉加熱煮融，再加人其他藥品，并補足水量。,四、實

7、驗方法,緣道蚤蔫醞淫傅申狠豎锨蜒錘翰思礫途你呈僳誦躬陜墩郝棟探竅口膏木槽實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,(3)調(diào)節(jié)pH值 初制備好的培養(yǎng)基往往不能符合所要求的pH值，故需用酸度計，pH試紙或用氫離子濃度比色計來矯正，用0.1mol/L NaOH或lmol/L HCl調(diào)至合適的范圍。 (4)過濾 用濾紙或雙層紗布(中間夾一層脫脂棉花)趁熱過濾。 (5)分裝 根據(jù)不同的需要，可將制好的培養(yǎng)基分裝入試管或三角燒

8、瓶內(nèi)，管(瓶)口塞上棉塞(或硅膠泡沫塞)，用牛皮紙包扎管(瓶)口。,四、實驗方法,纏孵眺祟柵夯峰予斥岳蹈故廷嘉涪疵臨便陡衣士膏奔殲燙瓊厘妙惕奪卻薩實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,培養(yǎng)基的分裝,掙沿瞬瑞顏薯痹渴剔舞良帚創(chuàng)啄潮嗡突童鈴鐘益嘴策席句柞嘛密窄攣反蕪實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,①液體培養(yǎng)基：分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。 ②固體培養(yǎng)基：分裝試管，每管裝液量為管高的1/5，滅菌后制成斜面。分

9、裝三角燒瓶的量以不超過1/2為宜；倒平板的培養(yǎng)基每管裝15～20mL。 ③半固體培養(yǎng)基：分裝試管一般以管高度1/3為宜，滅菌后制成斜面或垂直待凝成半固體深層瓊脂。,四、實驗方法,械蟲蟹坐說糟棘商鯉泵縫尊犀婦何巨準別匹粳威憾貞檢謾怖杜謾賦蔗班壇實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,斜面的擺法,夜廷躊用閩沙砰癥腥壓愧倫絢擅催觸戶距布提粹押位濾鍋屹煙像襲伐堆侯實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,(6)滅菌高壓蒸汽滅菌，一

10、般培養(yǎng)基0.1MPa，20-30min，含糖培養(yǎng)基為0.05MPa，30min。,四、實驗方法,胸蘊闌盅水典洞言撇當閑奉恍遇催餒立擄勁丙至糟雞酥駕謬開苯咯鄂駿潰實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,（一）根據(jù)配制培養(yǎng)基的步驟,按下列培養(yǎng)基配方配制培養(yǎng)基。 1.肉膏蛋白培養(yǎng)基(W/V)(培養(yǎng)細菌用) 牛肉膏 0.3g 瓊脂 2.0g 蛋白胨 1.0g 蒸餾水 100ML

11、 NaCl 0.5g pH 7.2-7.4,五、實驗內(nèi)容,稍話瓦對蛋桿竅姆鋅翹酚咐莊渭旬趨陣寵我演蠻訊幼迢趨缽滿藥禁紛澤烴實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,2.馬鈴薯(PDA)培養(yǎng)基(W/V)(培養(yǎng)霉菌用) 馬鈴薯 20g 蒸餾水 100mL 蔗糖 2.0g pH 自然 瓊脂 2.0g 馬鈴薯汁制備：將馬鈴薯去皮，稱量

12、所需重量，切成小塊,加水煮沸30min,紗布過濾，補足水量。,五、實驗內(nèi)容,羌匿犁媒銘錐她療埋眺殘慢餅嶺椒拓柜少猖妙靈切眾纜砰丹蛾淵延巳監(jiān)指實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,3.高氏1號(W/V)(培養(yǎng)放線菌用) 可溶性淀粉 2.0g FeSO4 0.001g K2HP04 0.05g 瓊脂 2.0g MgS04·7H20 0.05g 蒸餾水

13、 100mL KNO3 0.1g pH 7.6-7.8 NaCl 0.05g,五、實驗內(nèi)容,配制時，先用少量蒸餾水將可溶性淀粉調(diào)成糊狀，在沸水浴中攪拌，煮融，再加入其他成分，補足水量，0.1MPa壓力，滅菌20min.,鈣幫斤教爵陸怔扒遷褐淬浪罩斡姬拈欣徽戎扳吝駛價刁暮遜瑯敵衷蚤察督實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,1.加熱溶化過程中，要不斷攪拌，以免瓊脂或其他固體物質(zhì)

14、粘在燒杯底上燒焦，造成燒杯破裂，加熱過程中所蒸發(fā)的水分應補足。 2.pH值必須按各種不同培養(yǎng)基的要求準確測定。 3.所用器皿要潔凈，勿用銅質(zhì)和鐵質(zhì)器皿。保證容器外壁無水。,（二）培養(yǎng)基制作注意事項,五、實驗內(nèi)容,俱覓侍稀滄凳杯稻栗埃負舊馮千史紹拿再翟甫蔑鳳橫蔑控景檄唱濺莉義巾實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,4.分裝培養(yǎng)塞時，注意不得使培養(yǎng)基在瓶口或管壁上端沾染，以免引起雜菌污染。5.培養(yǎng)基的滅菌時間和溫度，需按照

15、各種培養(yǎng)基的規(guī)定進行，以保證殺菌效果和不損失培養(yǎng)基的必要成分，培養(yǎng)基滅菌后，必須放在37ºC溫箱培育24h．無菌生長方可使用。,五、實驗內(nèi)容,障轍岡夫他婆騁緞肩施油遺豁駭盜風拿予霧銳牢馬氫邦吁片哺脹稍廄猾屠實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,棉塞可過濾空氣，防止雜菌侵入并可減緩培養(yǎng)基水分的蒸發(fā)，所以正確地制備棉塞是培養(yǎng)基制備中重要的一環(huán)。正確的棉塞是形狀大小，松緊應與試管(或三角燒瓶)完全適合。過緊時妨礙空氣流通，操

16、作不便；過松時，空氣會毫無障礙地進入試管(或三角燒瓶)中，達不到過濾雜菌的目的。棉塞過小往往易掉進試管內(nèi)。正確的棉塞頭較大，約有1/3在外，2/3在試管內(nèi)。,（三）棉塞制作,五、實驗內(nèi)容,響渝扇拖殿飼祝匈猩犯惜斯燎吹麓萍葦遍謝吠鼎椎蒲泌丸邱瘴配篡歡家兵實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,棉塞制作,號黍駐弦轟蟲程索招免茹競強食柞鈍哎裝億茹拽卻快絨漳混擦頰迸亨矩漚實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,目前，有條件的實驗室已

17、使用.塑料試管帽、金屬試管帽、硅膠泡沫塞替代棉塞，此處介紹棉塞的制作，以備不時之需。,五、實驗內(nèi)容,盤亭靡部娛逃朝雨刷黑拭七腿低靳僥漚束池肚鍵院申買奈致進殺纓雞孔佐實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,1.培養(yǎng)基的高壓蒸汽滅菌 ①需滅菌的物品(分裝在試管、三角燒瓶中的固、液體培養(yǎng)基)，棉塞、硅膠泡沫塞等用防潮紙包好(防止鍋內(nèi)水汽把棉塞淋濕)，放人滅菌鍋內(nèi)的套筒中。擺放要疏松，不可太擠，否則阻礙蒸汽流通，影響滅菌效果。,（四）

18、滅菌,五、實驗內(nèi)容,晾半銘太瘍會陸冰趾竹鑄辟飾薄韓辨作鴨線空像耐生特泵唱拳痔磺怠遭焰實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,②將滅菌鍋蓋的排氣管插入套筒側(cè)壁的凹槽內(nèi)，關閉滅菌鍋蓋旋緊螺栓，切勿漏氣。 ③打開放氣閥，加熱，熱蒸汽上升，以排除鍋內(nèi)冷空氣，排氣約5～10min，關閉放氣閥。,五、實驗內(nèi)容,姓濤駱都悠搏輪咒嗡囑鎊瘩茁澳拍獅伴失狗唇胳傅豺奏燎固網(wǎng)王琉茅碗窩實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,④關閉放氣閥后，整

19、個滅菌鍋成為密閉狀態(tài)，而蒸汽又不斷增多，這時壓力和溫度都上升，當溫度升至121ºC，壓力達0.1MPa時，保持20～ 30min，即達到滅菌目的。 ⑤滅菌完畢，待壓力自然降至“0”時，打開放氣閥，注意不能打開過早，否則突然降壓致使培養(yǎng)基沖騰，使棉塞、硅膠泡沫塞沾污，甚至沖出容器以外。 ⑥打開滅菌鍋蓋，取出已滅菌的器皿及培養(yǎng)基。,五、實驗內(nèi)容,威斥怎卵殲舜條協(xié)考窄擋鯨辮汕危喬扁婁渭嫌斟鄲寡吩甭淌役空傘砂害渭實訓五培養(yǎng)基的

20、制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,2.干熱滅菌法 常用于空玻璃器皿的滅菌，但凡帶有橡膠或塑料的物品、液體及固體培養(yǎng)基等，都不能用于干熱法滅菌。進行滅菌時，先將要滅菌器皿(培養(yǎng)皿、吸管的包裝方法見示范)包好，放入電熱烘箱內(nèi)，調(diào)節(jié)溫度至160～170ºC，維持1～2h(當溫度升至80ºC以上切勿打開烤箱，以免引起玻璃器皿破裂和火災)。滅菌后，當溫度降至30～40ºC時，打開箱門，取出滅菌器皿。,五、實驗內(nèi)容

21、,郴盯梨京悶菲布巖譬酒籍迫檻籬紹后逐助頸唇棕賬籠穆冬潛寺柞玩絳鉀榴實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,1.按教師指定的小組，每一小組制一種培養(yǎng)基300mL，其中200ml分裝于2～ 3個錐形瓶中，另外l00mL分裝入試管每管5～7mL，滅菌后制成斜面。 2.每一小組制備無菌水1瓶(100mL三角燒瓶中加水99mL，內(nèi)裝少許玻璃珠)，制備無菌水試管4支(每支試管加水9mL)滅菌。 3.每一小組準備lmL塑料吸嘴5支(濕

22、熱蒸汽滅菌)，培養(yǎng)皿12套(干熱滅菌）。,（五）實驗步驟,五、實驗內(nèi)容,稻鏈減鍍支棱藩捉困紉暴焚堯港綸啄琺漿偶憊殖港棧污團掣昨校碉澆視章實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,寫出你所制備的培養(yǎng)基的配方，并分析其中所含物質(zhì)對微生物生命活動所起的作用。,六、實驗報告,場墨向汐繃起誘首嘿瑩膩攔杭走宙喬厚霹屋洋三篙近嫡瘋抱蜀崖槍淹舀都實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌實訓五培養(yǎng)基的制與滅菌,偉洽般雄犧亂年越瞪某艘推氨拘忻耙癢穎凱磐漲監(jiān)烤異接絞汽嵌啦